[發明專利]用于樣品制備的反應容器

在審

• 申請號: 201380072875.6
• 申請日: 2013-12-19
• 公開（公告）號: CN104994956A
• 公開（公告）日: 2015-10-21
• 發明（設計）人: 尼爾斯·A·庫拉克;馬提亞·曼恩;賽義德·巴貝克·阿茲米菲爾;納加朱納·納加拉杰
• 申請（專利權）人: 馬克斯·普朗克科學促進協會
• 主分類號: B01L3/00
• 分類號: B01L3/00;B01D15/22;G01N30/02;G01N30/60
• 代理公司: 北京德恒律治知識產權代理有限公司 11409
• 代理人: 章社杲;李偉

技術領域

本發明涉及用于從細胞材料、病毒和/或所述細胞材料和/或病毒的亞組分純化和/或富集生物有機化合物的樣品制備容器，容器包括反應室和層析介質；其中，所述反應室用于保持所述細胞材料、病毒和/或所述細胞材料和/或病毒的亞組分，并且配置為使得可以在其中實施以下反應的至少一個：裂解，例如，通過聲波處理和/或蒸煮；層析純化；還原；烷基化；以及諸如蛋白水解的酶促反應；其中，所述層析介質配置為純化和/或富集所述生物有機化合物；其中，(a)所述層析介質位于所述反應室的壁上，并且所述壁是閉合或密封的并且配置成為獲得純化和/或富集的生物有機化合物而開放；或(b)所述樣本制備容器還包括用于接收所述生物有機化合物的接收室，所述接收室鄰近所述層析介質，從而使得所述層析介質將所述反應室和所述接收室分隔開，并且所述接收室的外面是閉合的并且配置成為獲得純化和/或富集的生物有機化合物而開放。

背景技術

在本說明書中，引用了包括專利申請和制造商的手冊的許多文件。雖然不認為和本發明的專利性相關，但是這些文件的全部公開內容結合于此作為參考。更具體地，所有參考文件均相同程度地結合于此作為參考，猶如每個單獨的文件特定和單獨地結合于此作為參考。

用于富集特定生物材料的包括細胞裂解的樣本制備方法當前應用于生物研究的基本上所有領域。DNA、RNA和蛋白質的提取、純化和處理是用于這些和其他生物材料的體外分析的起始步驟。當前的方法涉及預凈化步驟和將這些材料轉移至不同的反應容器以避免阻塞諸如分析柱的分析設備以及有時富集期望的生物材料。樣品的純化在諸如結晶學和電子顯微鏡的生物研究的某些領域被視為是重要的。這些預清洗和樣品轉移步驟在樣品損失、延長的樣品制備時間、例如將分析的蛋白質的不期望的改性、污染的引入、在處理有害或傳染性材料中的潛在危害以及材料成本方面顯示出一些主要缺點。但是，它們通常被視為是不可缺少的。

由于不完全的提取以及與容器表面的擴大接觸(其中發生樣品吸收)，在預清洗粗制的裂解液的步驟中發生樣品損失。減少樣品損失的當前的解決方案包括非常嚴密的提取方法和反應管上的低結合表面。

反復的樣品轉移花費時間；尤其是研究者必須存在和需要處理樣品的手工操作。延長的UV光或氧暴露可能損壞樣品并且可以導致不期望的化學改性。這些問題的解決方案分別是光保護容器和屏蔽氣體的使用。然而，這些措施使樣品處理變得更加困難和耗時。此外，在容器之間傳遞樣品期間可能引入污染，并且目前僅可以通過在昂貴的超凈工作臺、層流下或具有類似的預防措施下工作來避免污染。此外，諸如病原體的有害樣品帶來污染與樣品管接觸的人或機器的風險。最后，樣品制備中的任何這些低效率以及多于最少量的一次性材料的使用都可以顯著地增加處理成本。

包括層析材料的諸如移液吸頭的設備在本領域是已知的并且可以從若干制造商購買并且包括Pierce?C-18吸頭(Thermo?Fisher)和C18-SD盒(3M)。這些設備在兩端均開口。這樣的設備不適合于單反應容器中的樣品制備。本文中的樣品制備包括從細胞材料制備用于質譜分析的肽和多肽和/或從細胞材料制備用于表達譜的核酸。

Rappsilber等人(Anal?Chem.；75(3):663-70(2003))描述了也稱為“階段吸頭”的設備，“階段吸頭”在兩端均開口并且允許以緊湊的格式層析的性能。

歐洲專利申請EP1033169描述了用于固相萃取的吸附劑盒。根據EP1033169的盒的特征是在吸頭的遠端處具有開口，該開口標示有標號(18)，該開口對于盒的功能是必要的。在遠端處提供了固相萃取材料，優選地，以珠子的形式。雖然蓋(32)關閉吸附劑盒的近端，但是遠端需要是開放的或打開以使原材料與珠子接觸。本發明的設備的底部(當使用EP1033169的術語時為“遠端”)由閉合或密封的壁制成或者以閉合的接收室的形式提供。然而加載原材料是可能的，即在上(“近”)端。然而，根據EP1033169的樣品加載僅當遠端開放時是可能的。

發明內容

鑒于本領域中可用的工具和方法的限制，本發明的技術問題可以視為提供用于樣品制備的設備和方法，其中，所述樣品制備在單反應容器中實現而不用任何轉移步驟。