[發(fā)明專利]包括原始小球藻脂質(zhì)途徑基因的基因工程化微生物菌株

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201380072393.0
• 申請(qǐng)日: 2013-12-06
• 公開（公告）號(hào): CN104968788A
• 公開（公告）日: 2015-10-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: S·富蘭克林;S·布魯貝克;G·N·魯?shù)た?/a>;R·巴特;M·肖阿-阿扎爾;A·索曼奇;A·俄溫
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 索拉茲米公司
• 主分類號(hào): C12N15/31
• 分類號(hào): C12N15/31;C12N15/79;C12N1/13;C12P7/64
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所 11247
• 代理人: 黃革生;林柏楠

1.一種重組核酸，包含編碼原始小球藻脂質(zhì)生物合成蛋白的編碼序列。

2.如權(quán)利要求1所述的重組核酸，其中該脂質(zhì)生物合成蛋白是選自表1中的蛋白。

3.如權(quán)利要求2所述的重組核酸，其中該蛋白相比表1中的蛋白具有至少一個(gè)點(diǎn)突變。

4.如權(quán)利要求1所述的重組核酸，其中該蛋白與表1中的蛋白具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％或95％的序列一致性。

5.如權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的重組核酸，其中該編碼序列與一個(gè)啟動(dòng)子可操作連接。

6.如權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的重組核酸，其中該編碼序列與一個(gè)非翻譯控制元件可操作連接。

7.如權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的重組核酸，其中該編碼序列與一個(gè)靶向序列可操作連接。

8.如權(quán)利要求7所述的重組核酸，其中該靶向序列是選自質(zhì)體靶向序列和線粒體靶向序列的組的轉(zhuǎn)運(yùn)肽。

9.如權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的重組核酸，其中該核酸是DNA分子。

10.如權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的重組核酸，該重組核酸編碼功能性原始小球藻脂質(zhì)生物合成蛋白。

11.如權(quán)利要求3所述的重組核酸，其中該蛋白是具有至少一個(gè)點(diǎn)突變的二酰基甘油二酰基轉(zhuǎn)移酶(DGAT)。

12.如權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的重組核酸，該重組核酸進(jìn)一步編碼蔗糖轉(zhuǎn)化酶。

13.如權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)所述的重組核酸，該重組核酸進(jìn)一步編碼抑制原始小球藻脂質(zhì)生物合成基因表達(dá)的抑制性RNA。

14.一種表達(dá)盒，包含如權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)所述的重組核酸。

15.一種用如權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)所述的重組核酸轉(zhuǎn)化的基因工程化微生物細(xì)胞。

16.如權(quán)利要求15所述的基因工程化微生物細(xì)胞，其中該細(xì)胞是無綠藻屬或小球藻屬細(xì)胞。

17.如權(quán)利要求16所述的基因工程化微生物細(xì)胞，其中該細(xì)胞是原始小球藻屬細(xì)胞。

18.如權(quán)利要求17所述的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞包含選自表1中列出基因的一種內(nèi)源性脂質(zhì)生物合成基因和一種或多種外源性原始小球藻脂質(zhì)生物合成基因兩者。

19.如權(quán)利要求18所述的細(xì)胞，其中所述外源基因編碼脂質(zhì)生物合成蛋白，并且其中該脂質(zhì)生物合成蛋白的氨基酸序列與該內(nèi)源性脂質(zhì)生物合成蛋白一致。

20.如權(quán)利要求19所述的細(xì)胞，其中所述外源基因包含一個(gè)核苷酸序列，其中編碼該脂質(zhì)生物合成蛋白的氨基酸的核苷酸序列的密碼子已經(jīng)改變。

21.如權(quán)利要求15至20中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞，其中所述外源基因編碼與天然原始小球藻蛋白具有至少50％氨基酸一致性的蛋白。

22.如權(quán)利要求15至21中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞，其中所述外源基因與非天然原始小球藻啟動(dòng)子的啟動(dòng)子元件可操作連接。

23.如權(quán)利要求15至22中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞，其中所述外源基因與非天然原始小球藻非翻譯控制元件的非翻譯控制元件可操作連接。

24.如權(quán)利要求15至23中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞，其中所述外源基因與編碼非天然原始小球藻轉(zhuǎn)運(yùn)肽的轉(zhuǎn)運(yùn)肽的核苷酸序列可操作連接。

25.如權(quán)利要求24所述的細(xì)胞，其中該轉(zhuǎn)運(yùn)肽是質(zhì)體靶向序列或線粒體靶向序列。

26.如權(quán)利要求15至25中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞，其中該細(xì)胞具有與SEQ?ID?NO:5或SEQ?ID?NO:60具有至少75％核苷酸一致性的23S?rRNA序列。

27.如權(quán)利要求15至26中任一項(xiàng)所述的原始小球藻細(xì)胞，其中該細(xì)胞具有為至少10％C8-C14的脂肪酸譜。

28.如權(quán)利要求15至26中任一項(xiàng)所述的原始小球藻細(xì)胞，其中該細(xì)胞具有為至少50％C12的脂肪酸譜。