[發(fā)明專利]改良的?；D(zhuǎn)移酶多核苷酸、多肽、及其使用方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380069478.3
• 申請日: 2013-10-22
• 公開（公告）號: CN104903451B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發(fā)明（設計）人: 尼古拉斯·約翰·羅伯茨;艾米·克里斯蒂安·柯倫;宋路泰·威尼查亞庫;瑪麗薩·羅丹;理查德·威廉·斯科特;大衛(wèi)·查爾斯·泰勒;伊麗莎白-弗朗斯·馬里利亞
• 申請（專利權(quán)）人: 農(nóng)業(yè)研究有限公司;加拿大國家研究委員會
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12P7/64
• 代理公司: 北京天昊聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11112
• 代理人: 丁業(yè)平;高釗

1.一種編碼嵌合體DGAT1蛋白的分離的多核苷酸，所述嵌合體DGAT1蛋白包括：

a)在其N末端處的第一DGAT1蛋白的N端部分，以及

b)在其C末端處的第二DGAT1蛋白的C端部分，

其中所述第一DGAT1蛋白的N端部分和第二DGAT1蛋白的C端部分之間的連接位于第一DGAT1蛋白和第二DGAT1蛋白的乙酰CoA結(jié)合位點中的對應位置，使得所述嵌合體DGAT1內(nèi)的乙酰CoA結(jié)合位點的長度與第一DGAT1蛋白和第二DGAT1蛋白內(nèi)的乙酰CoA結(jié)合位點的長度相同，以及其中與在對照細胞中產(chǎn)生脂質(zhì)時相比，所述嵌合體DGAT1蛋白在細胞中表達時產(chǎn)生至少多15％的脂質(zhì)。

2.權(quán)利要求1所述的多核苷酸，其中與所述第一DGAT1蛋白、所述第二DGAT1蛋白、或所述第一DGAT1蛋白和所述第二DGAT1蛋白這二者相比，所述嵌合體DGAT1蛋白具有以下至少一者：

i)增強的DGAT1活性；

ii)提高的穩(wěn)定性；

iii)改變的低聚性；

iv)正常的細胞內(nèi)積聚性；以及

v)正常的細胞內(nèi)定位性。

3.權(quán)利要求1所述的多核苷酸，其中所述第一DGAT1蛋白的N端部分和所述第二DGAT1蛋白的C端部分之間的連接位于第一DGAT1蛋白和第二DGAT1蛋白的乙酰CoA結(jié)合位點中的保守LSS(Leu-Ser-Ser)內(nèi)。

4.權(quán)利要求1所述的多核苷酸，其中所述嵌合體DGAT1具有完整的乙酰CoA結(jié)合位點。

5.權(quán)利要求1所述的多核苷酸，其中在細胞中表達時，所述嵌合體DAGT1蛋白與第一DGAT1蛋白和第二DGAT1蛋白中至少一者相比，底物特異性改變。

6.一種遺傳構(gòu)建體，其包含權(quán)利要求1至5中任一項所述的多核苷酸。

7.一種非植物細胞，包含權(quán)利要求1至5中任一項所述的多核苷酸，其中所述細胞表達所述嵌合體DGAT1蛋白，并且因此所述細胞與對照細胞相比，產(chǎn)生至少多15％的脂質(zhì)。

8.權(quán)利要求7所述的非植物細胞，其表達所述嵌合體DGAT1。

9.權(quán)利要求7或8所述的非植物細胞，其中與所述第一DGAT1、所述第二DGAT1、或所述第一DGAT1和所述第二DGAT1這二者相比，所述嵌合體DGAT1蛋白具有以下至少一者：

i)增強的DGAT1活性；

ii)提高的穩(wěn)定性；

iii)改變的低聚性；

iv)正常的細胞內(nèi)積聚性；以及

v)正常的亞細胞定位性。

10.權(quán)利要求7至9中任一項所述的非植物細胞，該非植物細胞與對照細胞相比，具有改變的脂質(zhì)組成。

11.權(quán)利要求7至10中任一項所述的非植物細胞，該非植物細胞也被轉(zhuǎn)化以表達以下至少一者：油質(zhì)蛋白、油體固醇蛋白、油體鈣蛋白、聚油質(zhì)蛋白、以及包括至少一個人工引入的半胱氨酸的油質(zhì)蛋白。

12.一種嵌合體DGAT1蛋白，其包括：

a)在其N末端處的第一DGAT1蛋白的N端部分，以及

b)在其C末端處的第二DGAT1蛋白的C端部分，

其中所述第一DGAT1蛋白的N端部分和第二DGAT1蛋白的C端部分之間的連接位于第一DGAT1蛋白和第二DGAT1蛋白的乙酰CoA結(jié)合位點中的對應位置，使得所述嵌合體DGAT1內(nèi)的乙酰CoA結(jié)合位點的長度與第一DGAT1蛋白和第二DGAT1蛋白內(nèi)的乙酰CoA結(jié)合位點的長度相同，以及其中與在對照細胞中產(chǎn)生脂質(zhì)時相比，所述嵌合體DGAT1蛋白在細胞中表達時產(chǎn)生至少多15％的脂質(zhì)。