[發明專利]新的黏膜佐劑和遞送系統

有效

• 申請號: 201380068777.5
• 申請日: 2013-10-29
• 公開（公告）號: CN104884069B
• 公開（公告）日: 2018-11-27
• 發明（設計）人: B·M·哈吉斯;N·R·普姆弗德;M·穆爾甘;S·西瓦拉爾瑪艾哈;G·特列斯;A·沃爾芬登
• 申請（專利權）人: 阿肯色大學評議會
• 主分類號: A61K31/715
• 分類號: A61K31/715;A61K31/716;C07H15/04
• 代理公司: 北京戈程知識產權代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉;程云

本文提供佐劑，其包含與醛交聯的殼聚糖或甘露糖化的殼聚糖。還提供制備所述佐劑的方法以及將佐劑與抗原組合或連接的方法。所述佐劑抗原組合可用在疫苗制劑中，以及在接種動物的方法中可使用所述疫苗制劑以針對抗原的來源或提高受試者中的免疫應答。

相關申請的交叉引用

本專利申請要求提交日為2012年10月29日的美國臨時專利申請號61/719,713的優先權的權益，其以全文引用并入本文。

背景技術

佐劑是改變其它試劑例如藥物或疫苗效果的藥理學或免疫學試劑。佐劑通常包含在疫苗中以增強受體對所提供的抗原的免疫應答，同時將注入的異物保持在最低限度。

佐劑自身并不賦予免疫性。佐劑可以以不同方式作用以提呈抗原至免疫系統。佐劑可以作為抗原的倉庫(depot)，在很長一段時間內提呈抗原，從而在身體清除抗原之前使免疫應答最大化。倉庫型佐劑的實例是油乳化劑，如弗氏佐劑。佐劑也可以作為導致身體招募并擴大其免疫應答的刺激物。例如，含有每種靶細菌所產生的微量毒素的破傷風、白喉和百日咳疫苗還含有氫氧化鋁。鋁鹽是美國銷售疫苗中的常見佐劑，而且在疫苗中已經使用超過70年。

殼聚糖是由隨機分布的β-(1-4)-連接的D-葡糖胺(脫乙酰化單元)和N-乙酰基-D-葡糖胺(乙酰化單元)組成的線性多糖。它通過用堿性氫氧化鈉處理蝦和其它甲殼類殼制成。殼聚糖在用作口服和皮下疫苗載體上取得一些成功。在這里，我們提供新的基于殼聚糖的佐劑制劑，已證明其作為佐劑比傳統使用的明礬佐劑表現更佳。具體地，本文提供的基于殼聚糖的佐劑有效刺激IgA應答。

發明內容

本文提供佐劑、包含所述佐劑的疫苗制劑、制備所述佐劑的方法以及使用所述佐劑和疫苗制劑的方法。具體地，殼聚糖和抗原可以通過使用醛進行交聯。在一方面，提供包含0.5％至2％的醛交聯的殼聚糖以及抗原的組合物。在疫苗組合物中醛的終濃度不高于0.5％。

在另一方面，提供佐劑組合物，其包括連接至殼聚糖的碳水化合物以形成希夫堿。所述佐劑可以與抗原組合。所述碳水化合物可以是甘露糖。

在又一方面，提供疫苗制劑。疫苗制劑可包括本文提供的佐劑和抗原。所述抗原可以是蛋白或自然中的微生物，合適的微生物包括細菌、酵母、或其它真菌、真核寄生蟲以及病毒，其可被減毒、重組、失活(killed)或者滅活(inactivated)。

在還一方面，本文提供制備佐劑和疫苗組合物的方法。在乙酸溶液中溶解殼聚糖以及添加抗原至溶解的殼聚糖。最后，使用醛將抗原和殼聚糖組合起來以使醛的終濃度在0.02％和0.5％之間。可向佐劑加入Tris來淬滅游離醛以產生更穩定的佐劑。

在再一方面，還提供增強受試者對抗原免疫應答的方法。所述方法包括向受試者施用本文所公開的包含抗原和基于殼聚糖的佐劑的疫苗制劑。所述基于殼聚糖的佐劑可以是醛交聯的殼聚糖或碳水化合物連接的殼聚糖。

附圖說明

圖1顯示在使用所述疫苗佐劑制劑初次接種疫苗以及加強后在火雞中的抗β-半乳糖苷酶IgG抗體應答。不同的字母表示顯著性差異(p≤0.05)。

圖2顯示在使用所述疫苗佐劑制劑初次接種疫苗以及加強后在火雞中的敗血梭狀芽胞桿菌(Clostridium septicum)IgG抗體應答。不同的字母表示顯著性差異(p≤0.05)。

圖3是一組圖，其顯示在使用所述芽孢桿菌屬(Bacillus)載體的禽流感疫苗佐劑制劑進行接種疫苗和加強之后在各個時間點上在雞中的IgG(圖3A)和IgA(圖3B)抗體應答。

圖4顯示在使用所述疫苗佐劑制劑初次接種疫苗以及加強后使用競爭性ELISA測量的針對沙門氏菌屬(Salmonella)的IgG抗體水平。不同的字母表示顯著性差異(p≤0.05)。