[發明專利]一種用于基因-藥物治療的新型試劑

有效

• 申請號: 201380068711.6
• 申請日: 2013-10-29
• 公開（公告）號: CN105101951B
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發明（設計）人: 朱興奮;何潤琪;周礪寒
• 申請（專利權）人: 新加坡科技研究局;新加坡國立大學
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K38/00;A61K31/711;A61K48/00;A61P35/00;C12N15/87
• 代理公司: 北京世峰知識產權代理有限公司 11713
• 代理人: 康健;王思琪

本發明涉及一種用于以遺傳物質轉染細胞的組合物，其包括能夠引導遺傳物質遠離細胞酸性區室的第一劑和能夠穩定微管或其網絡的第二劑。本發明還涉及所述組合物在制備用于治療疾病的藥物中的應用，一種用于遞送遺傳物質到細胞內的方法以及一種試劑盒。

相關申請交叉引用

本申請要求2012年10月29日提交的美國臨時申請No.61/719,908的優先權，就所有目的而言，其內容通過引用整體地結合于本文中。

技術領域

本公開內容涉及用于以遺傳物質轉染細胞的組合物。特別是，本發明涉及使用組合物轉染細胞，所述組合物包括能夠引導遺傳物質遠離細胞酸性區室的第一劑和能夠穩定微管或其網絡的第二劑。

背景技術

pDNA、反義寡核苷酸和shRNA的基因遞送為毀滅性疾病的治療提供了可能，所述毀滅性疾病包括神經退行性疾病和脊髓損傷，對于這些毀滅性疾病，目前處治選擇有限。然而，以基于核酸的治療作為生物學的一個新類別仍然處于發展的初期階段?；蜻f送的功效需要將這些分子遞送到細胞內，遞送策略存在巨大的挑戰?？紤]到與病毒載體臨床應用有關的不足，因現有的非病毒載體轉染分化神經元不佳，由于非病毒基因遞送降低了免疫原性、可適應大尺寸轉基因的能力、改善的安全性和便于制造的原因，其成為有吸引力的替代。

聚乙烯亞胺(LPEI)，一種現成的轉染劑，已被用于轉染各種類型的細胞，包括神經元的體內(in vivo)和體外(in vitro)的轉染。人們認為LPEI將DNA 凝聚到納米粒子中，由于LPEI的陽離子特性，通過結合到位于細胞表面的帶負電荷的硫酸類肝素蛋白促進了這些載體進入細胞。人們認為內化后， LPEI/DNA納米復合物被運輸到細胞核周圍區域。然后假設LPEI可以通過“質子海綿效應”逃離內體，將DNA從聚合物上釋放，隨后DNA被攝取進入細胞核。

目前，通過優化使用LPEI的實驗方法來提高分化的神經元細胞的轉染效率和細胞存活率的努力獲得的成效有限。已經嘗試在非神經元細胞、原代神經元和神經元細胞系中鑒定限制高轉染效率的潛在機制。包括神經元細胞在內的非分裂的、有絲分裂后細胞的不良轉染通常被認為是由于pDNA在核內轉運中的推測缺陷。另外認為內化和細胞內的障礙限制了分化的神經元細胞的轉染。通過提高攝取，發現更多的神經元細胞表達轉基因，但是僅少量地 (總細胞數的2％至6％)。迄今為止，在分化的神經元中使用非病毒載體實現高轉染效率的目標仍然很難，產生更多具有這種特性的新型聚合物的努力仍繼續。

盡管對各種毀滅性疾病(如癌癥、自身免疫性疾病和神經退行性疾病) 診斷上有了顯著改進且處治上有了創新，但這些疾病的有效處治仍存在較多的挑戰。目前，低的轉染和遞送效率限制了藥物-基因治療的應用。正是這種不滿足的需求，要求開發方法以提高活體外和活體內的基因遞送，隨后采用這種技術開發蓋倫制劑。

因此，本公開的目的在于改善上述不足，并提供改進的轉染效率。

發明內容

第一方面，本發明提供了一種用于以遺傳物質轉染細胞的組合物，其包括能夠引導遺傳物質遠離細胞酸性區室的第一劑和能夠穩定微管或其網絡的第二劑。

第二方面，本發明提供了一種將遺傳物質遞送到細胞內的方法，其包括借助組合物施用遺傳物質的步驟。

第三方面，本發明提供一種組合物在制備用于治療疾病的藥物中的應用，所述疾病選自癌癥、SMA、骨癌、白血病、血癌、鐮狀細胞疾病、Wiskott-Aldrich 綜合征、HIV、遺傳性疾病、糖尿病、心臟疾病和神經退行性疾病。

第四方面，本發明提供一種組合物，其包括如本文所描述的第一劑和如本文所描述的第二劑。

第五方面，本發明提供一種試劑盒，其包括如本文所描述的組合物和使用說明書。

術語定義