[發明專利]鑒定生物標記物、治療靶點或治療試劑的高通量篩選方法

有效

• 申請號: 201380068556.8
• 申請日: 2013-12-02
• 公開（公告）號: CN105051205B
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發明（設計）人: 法布里斯·納瓦羅塔·Y·加西亞;喬納森·布呂尼奧;澤維爾·吉道爾;艾瑞克·敘爾皮斯
• 申請（專利權）人: 原子能和替代能源委員會
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京派特恩知識產權代理有限公司 11270
• 代理人: 景鵬;姚開麗

1.一種篩選感興趣的分子的方法，包括以下步驟：

a)在允許細胞整合至少一個合成的納米顆粒的條件下，使所述細胞與所述合成的納米顆粒的庫接觸，每一個合成的納米顆粒都包括候選分子、示蹤物和對所述候選分子具有特異性的唯一DNA標簽，其中，所述候選分子定位于每一個納米顆粒的表面；

b)選擇已經整合了所述示蹤物并且具有感興趣的表型的細胞；

c)通過鑒定所述唯一DNA標簽的序列，鑒定作為感興趣的分子的候選分子，該候選分子已經被整合到步驟b)選擇的細胞中；

其中，所述候選分子和所述唯一DNA標簽是兩個獨立的分子。

2.根據權利要求1所述的篩選方法，其中，所述示蹤物是磁性示蹤物，并且選擇已經整合了所述磁性示蹤物的細胞通過磁性細胞分選進行；或者，所述示蹤物是熒光團，并且選擇已經整合了所述熒光團的細胞通過流式細胞術進行。

3.根據權利要求1或2所述的篩選方法，其中，每一個納米顆粒都是直徑小于1微米的顆粒。

4.根據權利要求1或2所述的篩選方法，其中，所述納米顆粒進一步包括靶向細胞和/或器官的生物配體。

5.根據權利要求1或2所述的篩選方法，其中，所述納米顆粒是無機納米顆粒、有機納米顆粒或雜合納米顆粒。

6.根據權利要求5所述的篩選方法，其中，所述納米顆粒是脂質載體。

7.根據權利要求6所述的篩選方法，其中，所述脂質載體是納米乳劑形式的制劑微滴，包括連續的水相和至少一種分散相，并且包括：

a)至少5摩爾％的兩親性脂質，

b)15摩爾％至70摩爾％的至少一種陽離子表面活性劑，包括：

i)至少一種選自以下基團的親脂性基團：

基團R或R-(C＝O)-，其中，R代表含有11至23個碳原子的直鏈烴鏈；

含有12至24個碳原子的脂肪酸和磷脂酰乙醇胺的酯或酰胺；以及

聚(環氧丙烷)；以及

ii)至少一種選自以下基團的包括至少一種陽離子基團的親水性基團：

含有1至12個碳原子的、并且經至少一個陽離子基團間斷和/或取代的直鏈或支鏈烷基；以及

包括至少一個陽離子基團的親水性聚合基團；以及

c)10摩爾％至55摩爾％的包括至少一種聚(環氧乙烷)鏈的助表面活性劑，該聚(環氧乙烷)鏈含有至少25個乙撐氧單元；

d)增溶脂質；

e)可選地，膜融合脂質；

其中，兩親性脂質、陽離子表面活性劑和助表面活性劑的摩爾百分比是相對于兩親性脂質、陽離子表面活性劑、助表面活性劑和可選的膜融合脂質的總摩爾量。

8.根據權利要求7所述的篩選方法，其中，所述增溶脂質包括至少一種飽和脂肪酸甘油酯。

9.根據權利要求7所述的篩選方法，其中，在所述納米乳劑中：

所述陽離子表面活性劑選自：

N[1-(2,3-二油酰氧基)丙基]-N,N,N-三甲基氯化銨；

1,2-二油酰基-3-三甲胺-丙烷；

N-(2-羥乙基)-N,N-二甲基-2,3-雙(十四烷氧基-1-丙胺)；

1-[2-(油酰氧基)乙基]-2-油酰基-3-(2-羥乙基)咪唑啉；以及

雙十八烷基酰胺基甘氨酰基精胺；和/或

所述膜融合脂質是1,2-二油酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺；和/或

所述兩親性脂質是磷脂。

10.根據權利要求7所述的篩選方法，其中，在所述納米乳劑中，所述助表面活性劑枝接有靶向細胞核/或器官的生物配體。

11.根據權利要求1或2所述的篩選方法，其中，所述候選分子是可以調節RNA干擾機制的核苷酸序列。