[發明專利]親水性重組蛋白的部分精制方法

有效

• 申請號: 201380068309.8
• 申請日: 2013-12-18
• 公開（公告）號: CN104918950B
• 公開（公告）日: 2018-10-12
• 發明（設計）人: 大澤利昭;森田啟介
• 申請（專利權）人: 絲芭博株式會社
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C12P21/02;C07K14/435
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 王靈菇;白麗

本發明涉及一種親水性重組蛋白的部分精制方法，其為從表達親水性重組蛋白的宿主中將親水性重組蛋白部分精制的方法，其包含在上述表達親水性重組蛋白的宿主中添加溶解用溶劑，使宿主細胞溶解，將不溶物分離來得到溶解液的溶解液獲取工序；其中，上述親水性重組蛋白的親水性指數為0以下，上述溶解用溶劑為非質子性極性溶劑。上述溶解液優選用水系溶劑進行溶劑替換。

技術領域

本發明涉及親水性重組蛋白的部分精制(partial purification)方法，詳細而言，本發明涉及從表達親水性指數(hydropathy index)為0以下的重組蛛絲蛋白等親水性重組蛋白的宿主中將該親水性重組蛋白部分精制的方法。

背景技術

蛛絲纖維已知是具有高強度和韌性的纖維，其比高強度鋼、尼龍6(注冊商標)纖維等具有更高的強度和韌性。由于這樣的特性，蛛絲作為新型原料受到關注，利用基因重組技術進行了使作為蛛絲原料的蛛絲蛋白在大腸桿菌等宿主細胞中的表達、回收。例如專利文獻1中公開了通過重組DNA技術制造絡新婦蛛(Nephila clavipes)大吐絲管(majorampullate)拖絲蛋白、絡新婦蛛小吐絲管(minor ampullate)拖絲蛋白等蜘蛛拖絲蛋白。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：日本特開平6-98771號公報

發明內容

發明所要解決的課題

專利文獻1中，在使細胞溶解而將細胞內存在的重組蜘蛛拖絲蛋白釋放、回收時，通過用細胞殘渣溶解而蜘蛛拖絲蛋白不溶解的溶劑進行重復處理來使蜘蛛拖絲蛋白沉淀。但是，在重組蜘蛛拖絲蛋白為水不溶性蛋白時是有效的，當重組蛋白為親水性重組蛋白時，并不是有效的手段且期望工序的簡便化。

本發明為了解決上述以往的問題，提供一種能夠從表達親水性指數為0以下的重組蛛絲蛋白等親水性重組蛋白的宿主中簡便且高效地將親水性重組蛋白部分精制的親水性重組蛋白的部分精制方法。

用于解決課題的手段

本發明涉及一種親水性重組蛋白的部分精制方法，其為從表達親水性重組蛋白的宿主中將親水性重組蛋白部分精制的方法，其特征在于，其包含在上述表達親水性重組蛋白的宿主中添加溶解用溶劑，使宿主細胞溶解，將不溶物分離來得到溶解液的溶解液獲取工序，其中，上述親水性重組蛋白的親水性指數為0以下，上述溶解用溶劑為非質子性極性溶劑。

本發明的親水性重組蛋白的部分精制方法中，上述溶解用溶劑優選偶極矩為3.0D以上，更優選為選自二甲基亞砜、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、1,3-二甲基-2-咪唑啉酮和N-甲基-2-吡咯烷酮中的一種以上非質子性極性溶劑。上述溶解用溶劑優選為在上述非質子性極性溶劑中添加無機鹽而成的溶劑。上述不溶物的分離可以通過利用過濾的分離和/或離心分離來進行。上述溶解用溶劑相對于上述宿主的質量以體積(mL)/質量(g)比計優選添加0.5倍以上。優選將上述溶解液用水系溶劑進行溶劑替換。經溶劑替換的溶解液更優選進一步采用選自柱、過濾和離心分離中的一種以上方法處理。上述親水性重組蛋白優選為選自重組蛛絲蛋白、重組節肢彈性蛋白和重組膠原中的一種蛋白。

發明效果

根據本發明，通過使用非質子性極性溶劑作為溶解用溶劑，用溶解用溶劑使表達親水性指數為0以下的親水性重組蛋白的宿主溶解，將不溶物分離、回收溶解液，能夠簡便且高效地從宿主中將親水性指數為0以下的親水性重組蛋白部分精制。

另外，根據本發明，通過使用在非質子性極性溶劑中添加無機鹽而成的溶劑作為溶解用溶劑，能夠以更高的精制率將親水性指數為0以下的重組蛛絲蛋白、重組節肢彈性蛋白、重組膠原等親水性重組蛋白部分精制。

附圖說明