[發明專利]在原生動物中重組制備鱟C因子蛋白的方法

有效

• 申請號: 201380068105.4
• 申請日: 2013-12-04
• 公開（公告）號: CN104884616B
• 公開（公告）日: 2019-05-28
• 發明（設計）人: B·布赫爾格爾;H·格拉萊特;S·莫利納羅
• 申請（專利權）人: 海格羅斯投資有限責任公司
• 主分類號: C12N9/64
• 分類號: C12N9/64
• 代理公司: 北京邦信陽專利商標代理有限公司 11012
• 代理人: 黃澤雄;陳悅軍

1.一種寄生原生動物，其特征在于：含有編碼來自中國鱟(Tachypleus tridentatus)的鱟C因子蛋白的多聚核苷酸，其中，所述多聚核苷酸編碼具有SEQ ID No:4的氨基酸序列的C因子蛋白，所述原生動物表達雙鏈酶原形式的鱟C因子蛋白，所述鱟C因子蛋白具有在非還原條件下通過SDS-PAGE測定的約102kD的分子量，所述酶原在接觸脂多糖時產生酶活性，并且

其中所述寄生原生動物為蜥蜴利什曼原蟲(Leishmania tarentolae)。

2.根據權利要求1所述的寄生原生動物，其中所述多聚核苷酸由引入至寄生原生動物宿主細胞的核酸分子組成。

3.根據權利要求2所述的寄生原生動物，其中所述多聚核苷酸由引入至寄生原生動物宿主細胞的載體組成。

4.一種制備鱟C因子蛋白的方法，其包括步驟：

(a)在使得細胞表達由所述多聚核苷酸編碼的所述C因子蛋白的條件下培養權利要求1至3任一項所述的寄生原生動物；和

(b)從細胞培養物中回收在步驟(a)中制備的C因子蛋白。

5.根據權利要求4所述的方法，其中所述C因子蛋白在細胞培養基中積累。

6.根據權利要求4所述的方法，其中所制備的所述C因子蛋白在結合內毒素時呈現出絲氨酸蛋白酶活性。

7.由權利要求4的方法獲得的鱟C因子蛋白，所述鱟C因子蛋白具有非還原條件下通過SDS-PAGE測定的約102kD的分子量。

8.由權利要求4至6任一項所述的方法制備的鱟C因子蛋白在內毒素檢測體外方法或在內毒素清除體外方法中的用途，其中，所述方法不用于疾病診斷。

9.根據權利要求7的鱟C因子蛋白在內毒素檢測體外方法或在內毒素清除體外方法中的用途，其中，所述方法不用于疾病診斷。

10.一種用于內毒素檢測或內毒素清除的分析或試劑盒，其包括由權利要求4至6任一項所述的方法制備的鱟C因子蛋白，或權利要求7的鱟C因子蛋白。

11.一種產生制備鱟C因子蛋白的寄生原生動物宿主細胞的方法，其包括步驟：

(a)將含有編碼來自中國鱟的鱟C因子蛋白的多聚核苷酸的核酸分子引入到寄生原生動物，所述多聚核苷酸編碼具有SEQ ID No:4的氨基酸序列的C因子蛋白；和

(b)選擇一個或多個在步驟(a)中制備的表達所述鱟C因子蛋白的宿主細胞，

其中所述寄生原生動物為蜥蜴利什曼原蟲(Leishmania tarentolae)。

12.根據權利要求11所述的產生制備鱟C因子蛋白的寄生原生動物宿主細胞的方法，其中，所述核酸分子是載體。

13.一種由權利要求11的方法獲得的寄生原生動物宿主細胞，其含有編碼來自中國鱟的鱟C因子蛋白的多聚核苷酸，其中所述多聚核苷酸編碼具有SEQ ID No:4的氨基酸序列的C因子蛋白，所述多聚核苷酸由引入至寄生原生動物宿主細胞的核酸分子組成，并且其中所述寄生原生動物為蜥蜴利什曼原蟲(Leishmania tarentolae)。

14.根據權利要求13所述的寄生原生動物宿主細胞，其中所述多聚核苷酸由載體組成。