[發明專利]灌注培養方法及其用途

在審

• 申請號: 201380067513.8
• 申請日: 2013-10-23
• 公開（公告）號: CN104903436A
• 公開（公告）日: 2015-09-09
• 發明（設計）人: J·楊;A·維利格-奧伯貝克;Y·楊
• 申請（專利權）人: 建新公司
• 主分類號: C12M1/24
• 分類號: C12M1/24;C12M1/00
• 代理公司: 北京市嘉元知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11484
• 代理人: 劉彬

1.一種培養哺乳動物細胞的方法，所述方法包括：

提供盛有哺乳動物細胞的錐形容器，所述細胞懸于占約4％至約80％容器容積的第一液體培養基中；

在約31℃至約40℃，以距水平約5度至約85度的反應者角度將容器溫育一段時間，并伴隨約20次轉動/每分鐘(RPM)至約1000RPM的旋轉攪拌；和

在這段時間期間連續地或定時地去除第一體積的第一液體培養基，并向第一液體培養基添加第二體積的第二液體培養基，其中第一和第二體積是約為相等的。

2.權利要求1的方法，其中所述第一體積的第一液體培養基是基本沒有哺乳動物細胞的。

3.權利要求1的方法，其中所述第一液體培養基占約4％至約30％的容器容積。

4.權利要求1的方法，其中所述哺乳動物細胞是中國倉鼠卵巢(CHO)細胞。

5.權利要求4的方法，其中所述CHO細胞含有編碼重組蛋白的核酸。

6.權利要求5的方法，其中所述重組蛋白是免疫球蛋白、酶、生長因子、蛋白片段、或經工程改造的蛋白。

7.權利要求1的方法，其中所述容器在距水平約40度至約55度溫育。

8.權利要求1的方法，其中第一體積的第一液體培養基的去除和第二體積的第二液體培養基的添加是同時進行的。

9.權利要求1的方法，其中第一體積的第一液體培養基的去除和第二體積的第二液體培養基的添加是連續進行的。

10.權利要求1的方法，其中第一體積的第一液體培養基的去除和第二體積的第二液體培養基的添加是定時地進行的。

11.權利要求1的方法，其中去除的第一體積的第一液體培養基和添加的第二體積的第二液體培養基是隨時間增加的。

12.權利要求11的方法，其中：

將容器溫育一段大于7天的時間，并在溫育的第1天經至第3天，在每24小時的時期內，去除的第一體積的第一液體培養基和添加的第二體積的第二液體培養基是第一液體培養基體積的約50％；

在溫育的第4天經至第6天，在每24小時的時期內，去除的第一體積的第一液體培養基和添加的第二體積的第二液體培養基是第一液體培養基體積的約70％；和

溫育第7天和自此起，在每24小時的時期內，去除的第一體積的第一液體培養基和添加的第二體積的第二液體培養基是第一液體培養基體積的約100％。

13.權利要求1的方法，其中所述錐形容器是透氣性的50mL至600mL的錐形容器。

14.權利要求1的方法，其中所述哺乳動物細胞懸于約2mL至約15mL的第一液體培養基中。

15.權利要求1的方法，其中所述第一液體培養基和/或第二液體培養基選自下組：化學上定義的液體培養基、無血清的液體培養基、含血清的液體培養基、無動物來源組分的液體培養基、和無蛋白質的培養基。

16.一種培養哺乳動物細胞的方法，所述方法包括：

在梯度灌注方法中培養哺乳動物細胞，所述細胞在這樣的條件下懸于液體培養基中，所述條件在培養基中產生與占透氣性的錐形容器容積的4％-40％的培養基中所達到的基本相同的溶解氧(O₂)濃度和流體剪切力，此時所述容器以距水平約5度至約85度的反應者角度放置、于約31℃至約40℃的溫度溫育、并以約20次轉動/每分鐘(RPM)至約1000RPM的頻率攪拌。

17.權利要求16的方法，其中所述錐形容器是透氣性的50mL至600mL的錐形容器。

18.權利要求16的方法，其中所述哺乳動物細胞是中國倉鼠卵巢(CHO)細胞。

19.權利要求18的方法，其中所述CHO細胞含有編碼重組蛋白的核酸。

20.權利要求19的方法，其中所述重組蛋白是免疫球蛋白、酶、生長因子、蛋白片段、或經工程改造的蛋白。

21.權利要求16的方法，其中所述液體培養基選自下組：化學上定義的液體培養基、無血清的液體培養基、含血清的液體培養基、無動物來源組分的液體培養基、和無蛋白質的培養基。