[發明專利]具有小型啟動子盒的逆轉錄病毒載體

在審

• 申請號: 201380067486.4
• 申請日: 2013-10-24
• 公開（公告）號: CN104884627A
• 公開（公告）日: 2015-09-02
• 發明（設計）人: 海瑞·E·格魯伯;道格拉斯·J·喬利;艾米·H·林;克里斯多弗·R·洛格;笠原典之
• 申請（專利權）人: 托卡根公司
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N7/01;A61P35/00
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

1.具有復制能力的重組γ逆轉錄病毒，其包含：

逆轉錄病毒GAG蛋白；

逆轉錄病毒POL蛋白；

逆轉錄病毒包膜；

逆轉錄病毒多核苷酸，其包含位于所述逆轉錄病毒多核苷酸序列3'端的長末端重復(LTR)序列、位于所述逆轉錄病毒多核苷酸5'端的啟動子序列、gag核酸結構域、pol核酸結構域和env核酸結構域，所述啟動子適于在哺乳動物細胞中表達；

治療盒，其包含具有可操作地連接至異源多核苷酸的小型啟動子的至少一個小型啟動子盒，其中所述治療盒位于3'LTR的5'端和編碼所述逆轉錄病毒包膜的env核酸結構域的3'端，并且其中當僅有一個小型啟動子盒存在時，所述異源多核苷酸的長度為1.2kb至2.0kb；以及

在靶細胞中逆轉錄、包裝和整合所必需的順式作用序列。

2.重組復制型逆轉錄病毒載體，其包含：

逆轉錄病毒GAG蛋白；

逆轉錄病毒POL蛋白；

逆轉錄病毒包膜；

逆轉錄病毒多核苷酸，其包含位于所述逆轉錄病毒多核苷酸序列3'端的長末端重復(LTR)序列、位于所述逆轉錄病毒多核苷酸5'端的啟動子序列、gag核酸結構域、pol核酸結構域和env核酸結構域，所述啟動子適于在哺乳動物細胞中表達；

治療盒，其包含含有可操作地連接至異源多核苷酸的小型啟動子的小型啟動子盒，其中所述小型啟動子盒位于3'LTR的5'端和編碼所述逆轉錄病毒包膜的env核酸結構域的3'端，其中所述小型啟動子缺少SCP1，Ad或CMV核心啟動子；以及

在靶細胞中逆轉錄、包裝和整合所必需的順式作用序列。

3.如權利要求1或2所述的逆轉錄病毒，其中所述逆轉錄病毒多核苷酸序列源自選自以下的病毒：鼠白血病病毒(MLV)，莫洛尼鼠白血病病毒(MoMLV)，貓白血病病毒(FeLV)，狒狒內源性逆轉錄病毒(BEV)，豬內源性病毒(PERV)，源自貓的逆轉錄病毒RD114，松鼠猴逆轉錄病毒，禽網狀內皮組織增殖病病毒(REV)，或長臂猿白血病病毒(GALV)。

4.如權利要求1或2所述的逆轉錄病毒，其中所述逆轉錄病毒包膜為兼嗜性MLV包膜。

5.如權利要求1或2所述的逆轉錄病毒，其中所述靶細胞為具有細胞增殖性病癥的細胞。

6.如權利要求1或2所述的逆轉錄病毒，其中所述靶細胞為贅生性細胞。

7.如權利要求5所述的逆轉錄病毒，其中所述細胞增殖性病癥選自：肺癌，結腸-直腸癌，乳腺癌，前列腺癌，尿道癌，子宮癌，腦癌，頭頸癌，胰腺癌，黑素瘤，胃癌和卵巢癌，淋巴瘤，白血病，類風濕性關節炎或其它自身免疫性疾病。

8.如權利要求1或2所述的逆轉錄病毒，其中所述啟動子序列與生長調控基因相關。

9.如權利要求1或2所述的逆轉錄病毒，其中所述啟動子序列包含組織特異性啟動子序列。

10.如權利要求9所述的逆轉錄病毒，其中所述組織特異性啟動子序列包含至少一個雄激素應答元件(ARE)。

11.如權利要求9所述的逆轉錄病毒，其中所述組織特異性啟動子序列包含至少一個糖皮質激素應答元件。

12.如權利要求1或2所述的逆轉錄病毒，其中所述啟動子包含CMV-R-U5結構域多核苷酸。

13.如權利要求12所述的逆轉錄病毒，其中所述CMV-R-U5結構域包含連接至MLV?R-U5區的來自人巨細胞病毒的立即早期啟動子。

14.如權利要求1或2所述的逆轉錄病毒，其中所述gag多核苷酸源自γ逆轉錄病毒。

15.如權利要求1或2所述的逆轉錄病毒，其中所述pol多核苷酸結構域源自γ逆轉錄病毒。

16.如權利要求1或2所述的逆轉錄病毒，其中所述小型啟動子是核心啟動子。

17.如權利要求1，2或16所述的逆轉錄病毒，其中所述小型啟動子是優化的核心啟動子。

18.前述權利要求中任一項所述的逆轉錄病毒，其中所述治療盒包含(a)至少兩個小型啟動子盒，(b)至少一個小型啟動子盒和polIII啟動子盒，或(c)至少一個小型啟動子盒和IRES盒。