[發(fā)明專利]包含I類MHC的二硫鍵連接多價(jià)多功能蛋白質(zhì)

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201380066835.0
• 申請(qǐng)日: 2013-12-18
• 公開（公告）號(hào): CN104884474A
• 公開（公告）日: 2015-09-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: G·喬治斯;S·伊姆霍夫-容;H·克內(nèi)根;M·施米特納高
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 弗·哈夫曼-拉羅切有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/28
• 分類號(hào): C07K16/28;C07K16/30;C07K14/705;C07K19/00;C07K14/74
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所 11247
• 代理人: 凌立;黃革生

1.二硫鍵連接的多價(jià)多功能蛋白質(zhì)，其特征在于它包含：

-一個(gè)或兩個(gè)抗原呈遞結(jié)構(gòu)域；

-一個(gè)抗體Fc區(qū)；和

-一個(gè)或多個(gè)抗原結(jié)合部位；

其中抗原呈遞結(jié)構(gòu)域按N端至C端方向包含：

(i)β2-微球蛋白；和

(ii)相對(duì)頻率低于1％的I類MHC分子的胞外域α1、α2和α3；

或

(i)相對(duì)頻率低于1％的I類MHC分子的胞外域α1、α2和α3；和

(ii)β2-微球蛋白；

或

(i)T細(xì)胞應(yīng)答引出肽；

(ii)β2-微球蛋白；和

(iii)相對(duì)頻率為1％或更高的I類MHC分子的胞外域α1、α2和α3；

或

(i)T細(xì)胞應(yīng)答引出肽；

(ii)相對(duì)頻率為1％或更高的I類MHC分子的胞外域α1、α2和α3；和

(iii)β2-微球蛋白；

其中抗原結(jié)合部位結(jié)合癌細(xì)胞表面抗原；且

其中抗原呈遞結(jié)構(gòu)域具有至少兩個(gè)形成鏈內(nèi)/結(jié)構(gòu)域間二硫鍵的非天然存在的半胱氨酸殘基。

2.權(quán)利要求1的二硫鍵連接多價(jià)多功能蛋白質(zhì)，其特征在于抗原呈遞結(jié)構(gòu)域中的一個(gè)非天然存在的半胱氨酸殘基在T細(xì)胞應(yīng)答引出肽之間的接頭中，一個(gè)非天然存在的半胱氨酸殘基在I類MHC分子的胞外域α1、α2和α3之一中。

3.權(quán)利要求1或2中任一項(xiàng)的二硫鍵連接多價(jià)多功能蛋白質(zhì)，其特征在于：

所述抗原呈遞結(jié)構(gòu)域至少在11位和227位具有半胱氨酸殘基，且11位和227位的半胱氨酸殘基形成二硫鍵；或

所述抗原呈遞結(jié)構(gòu)域至少在11位和108位具有半胱氨酸殘基，且11位和108位的半胱氨酸殘基形成二硫鍵。

4.權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的二硫鍵連接多價(jià)多功能蛋白質(zhì)，其特征在于所述抗體Fc區(qū)包含第一和第二條二硫鍵連接Fc區(qū)多肽，由此抗原結(jié)合部位或抗原結(jié)合部位之一包含第一Fc區(qū)多肽和含有第二Fc區(qū)多肽的第二抗原結(jié)合部位(如果存在)。

5.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的二硫鍵連接多價(jià)多功能蛋白質(zhì)，其特征在于所述抗原結(jié)合部位包含：i)一對(duì)抗體重鏈和抗體輕鏈；或ii)按N端至C端方向包含scFv抗體片段和抗體Fc區(qū)多肽的scFv融合多肽；或iii)按N端至C端方向包含scFab和抗體Fc區(qū)多肽的scFab融合多肽；

或

所述抗原結(jié)合部位相互獨(dú)立地包含：i)一對(duì)(關(guān)聯(lián))抗體重鏈和抗體輕鏈，由此單條鏈可以是野生型鏈或經(jīng)修飾的鏈(取代、突變或結(jié)構(gòu)域交換)；或ii)按N端至C端方向包含scFv抗體片段和抗體Fc區(qū)多肽的scFv融合多肽；或iii)按N端至C端方向包含scFab和抗體Fc區(qū)多肽的scFab融合多肽。

6.權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的二硫鍵連接多價(jià)多功能蛋白質(zhì)，其特征在于：i)抗原呈遞結(jié)構(gòu)域與抗原結(jié)合部位的重鏈N端或輕鏈N端連接，或ii)一個(gè)抗原呈遞結(jié)構(gòu)域與每個(gè)抗原結(jié)合部位的每個(gè)重鏈N端或每個(gè)輕鏈N端連接，或iii)抗原呈遞結(jié)構(gòu)域與抗原結(jié)合部位的重鏈C端或輕鏈C端連接，或vi)一個(gè)抗原呈遞結(jié)構(gòu)域與每個(gè)抗原結(jié)合部位的每個(gè)重鏈C端或每個(gè)輕鏈C端連接，或v)抗原呈遞結(jié)構(gòu)域與scFv融合多肽的N端或C端連接，或vi)一個(gè)抗原呈遞結(jié)構(gòu)域與每個(gè)scFv融合多肽的每個(gè)N端或C端連接，或vii)抗原呈遞結(jié)構(gòu)域與scFab融合多肽的N端或C端連接，或viii)一個(gè)抗原呈遞結(jié)構(gòu)域與每個(gè)scFab融合多肽的每個(gè)N端或C端連接，或ix)抗原呈遞結(jié)構(gòu)域與第二Fc區(qū)多肽的N端或C端連接，或x)一個(gè)抗原呈遞結(jié)構(gòu)域與第一Fc區(qū)多肽的N端或C端連接，一個(gè)抗原呈遞結(jié)構(gòu)域與第二Fc區(qū)多肽的N端或C端連接。

7.權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)的二硫鍵連接多價(jià)多功能蛋白質(zhì)，其特征在于所述T細(xì)胞應(yīng)答引出肽是人巨細(xì)胞病毒衍生肽。

8.權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)的二硫鍵連接多價(jià)多功能蛋白質(zhì)，其特征在于所述病毒衍生肽具有SEQ?ID?NO:01的氨基酸序列。

9.權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的二硫鍵連接多價(jià)多功能蛋白質(zhì)，其特征在于所述相對(duì)頻率為1％或更高的I類MHC分子選自HLA-A*0201、HLA-A*1101、HLA-A*2402、HLA-A*340101、HLA-C*0304、HLA-C*0401和HLA-C*0702。