[發(fā)明專利]包含向?qū)NA和CAS蛋白質(zhì)編碼核酸或CAS蛋白質(zhì)的組合物及其用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201380066348.4
• 申請(qǐng)日: 2013-10-23
• 公開（公告）號(hào): CN104968784B
• 公開（公告）日: 2019-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金進(jìn)秀;曹承于;金素貞;J·M·金;金爽中
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 基因工具股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;C12N9/22;C12N15/90
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所 11247
• 代理人: 張莉;黃革生

1.一種在體外在人類細(xì)胞中在靶核酸序列上引入位點(diǎn)特異性雙鏈斷裂的方法，所述方法包括：

(i)將編碼包含核定位信號(hào)的化膿性鏈球菌Cas9蛋白質(zhì)的核酸引入人類細(xì)胞中；

(ii)將編碼向?qū)NA的核酸引入人類細(xì)胞，其中所述向?qū)NA包含CRISPR RNA(crRNA)的部分與反式激活crRNA(tracrRNA)的部分，其中所述向?qū)NA與人類細(xì)胞中的靶核酸序列雜交，并且其中所述向?qū)NA在crRNA部分的5’末端還包含2個(gè)附加的鳥嘌呤核苷酸；

其中Cas9蛋白與所述向?qū)NA在人類細(xì)胞中形成Cas9/RNA復(fù)合物，其中所述Cas9蛋白質(zhì)識(shí)別人類細(xì)胞中靶核酸序列中的三核苷酸原間隔區(qū)鄰近基序(PAM)，且其中Cas9/RNA復(fù)合物在人類細(xì)胞中在靶核酸序列上介導(dǎo)雙鏈斷裂。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述靶核酸是內(nèi)源性靶核酸。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中向?qū)NA是載體的形式。

4.權(quán)利要求1的方法，其中所述核定位信號(hào)位于Cas9蛋白的C端。

5.權(quán)利要求1的方法，其中所述編碼Cas9蛋白的核酸是針對(duì)在人類細(xì)胞中的表達(dá)而密碼子優(yōu)化的。

6.權(quán)利要求1的方法，其中PAM是5’-NGG-3’三核苷酸。