[發明專利]靶向VEGFR-2和DLL4的雙靶向抗體及包含它的藥物組合物

在審

• 申請號: 201380065951.0
• 申請日: 2013-11-20
• 公開（公告）號: CN104870476A
• 公開（公告）日: 2015-08-26
• 發明（設計）人: 金重圭;柳珍山;李尚勳;李元燮;金圣祐;沈相烈;柳珍相;李英愛;樸美珠;卞相順;李赫峻;金度鈗;金衍周;崔真熺;南坰晞;南周伶;鄭鍾根;鄭寶煐;李銀真;李善暎;樸仁俶;李真淑;尹載烽;金男禮;吳先煥
• 申請（專利權）人: 藥物抗體公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K16/46;C12N15/62;A61K39/395
• 代理公司: 北京律誠同業知識產權代理有限公司 11006
• 代理人: 徐金國

1.一種靶向VEGFR-2和DLL4的雙靶向抗體。

2.根據權利要求1的雙靶向抗體，其中所述抗體包含DLL4拮抗劑，該DLL4拮抗劑與結合VEGFR-2的抗體的末端結合。

3.根據權利要求2的雙靶向抗體，其中所述結合VEGFR-2的抗體是Tanibirumab或其變體。

4.根據權利要求2的雙靶向抗體，其中所述DLL4拮抗劑是人類Notch1的第十一和第十二鈣結合EGF樣結構域。

5.根據權利要求2的雙靶向抗體，其中所述DLL4拮抗劑與結合VEGFR-2的抗體的輕鏈可變區N-末端結合。

6.根據權利要求5的雙靶向抗體，其中所述DLL4拮抗劑通過氨基酸接頭與結合VEGFR-2的抗體結合。

7.根據權利要求3的雙靶向抗體，其中所述結合VEGFR-2的抗體包含：包含選自SEQ?ID?NO：1至3的序列的重鏈可變區，和包含選自SEQ?ID?NO：4至6的序列的輕鏈可變區。

8.根據權利要求7的雙靶向抗體，其中所述結合VEGFR-2的抗體包括：包含SEQ?ID?NO：1的序列的重鏈可變區，和包含SEQ?ID?NO：4的序列的輕鏈可變區；

包含SEQ?ID?NO：2的序列的重鏈可變區，和包含SEQ?ID?NO：5的序列的輕鏈可變區；或

包含SEQ?ID?NO：3的序列的重鏈可變區，其包含SEQ?ID?NO：6的序列的輕鏈可變區。

9.根據權利要求4的雙靶向抗體，其中作為DLL4的拮抗劑的人類Notch1的第十一和第十二鈣結合EGF樣結構域包含SEQ?ID?NO：7的序列。

10.編碼根據權利要求1至9中任一項的雙靶向抗體的DNA。

11.一種重組表達載體，包含根據權利要求10的DNA。

12.由根據權利要求11的重組表達載體轉化的宿主細胞。

13.一種生產根據權利要求1至9中任一項的雙靶向抗體的方法，包括培養根據權利要求12的宿主細胞，然后從培養物中分離雙靶向抗體。

14.根據權利要求13的方法，還包括使用具有蛋白質A親和色譜、SP瓊脂糖凝膠色譜和大小排阻色譜的快速蛋白液相色譜法純化所述雙靶向抗體。

15.一種用于治療血管發生相關疾病的藥物組合物，包含根據權利要求1至9中任一項的雙靶向抗體。

16.根據權利要求15的組合物，所述血管發生相關疾病是選自腫瘤生長、腫瘤轉移、年齡相關的黃斑變性(ARMD)、糖尿病性視網膜病、銀屑病、類風濕性關節炎和慢性炎癥的組中的一種或多種。

17.根據權利要求16的組合物，所述癌癥是選自結腸癌、結腸直腸癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、肝癌、支氣管癌、鼻咽癌、喉癌、胰臟癌、膀胱癌、胰腺癌、宮頸癌、腦癌、前列腺癌、骨癌、皮膚癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎癌、食道癌、膽道癌、睪丸癌、直腸癌、頭頸癌、宮頸癌、輸尿管癌、骨肉瘤、神經細胞瘤、黑色素瘤、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤、星形細胞瘤、神經母細胞瘤和神經膠質瘤的組中的一種或多種。

18.一種測量根據權利要求1至9中任一項的雙靶向抗體的DLL4拮抗劑功效的方法，包括通過共培養表達人DLL4(hDLL4)的細胞系或具有人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)的重組細胞系，測量Notch?1的活性。

19.根據權利要求18的方法，其中測量Notch?1的活性是通過測量NICD的表達量來實現的。

20.根據權利要求19的方法，其中測量NICD的表達量是通過使用選自SDS-PAGE、Western印跡、免疫組織化學染色法、免疫染色法、免疫熒光法、ELISA測定法(直接測量)和熒光素酶測定法來實現的。

21.根據權利要求18的方法，其中所述重組細胞系是過表達hDLL4的293細胞系(293-hDLL4)。

22.根據權利要求18的方法，其中所述共培養物包括(a)培養HUVEC；和(b)將過表達hDLL4的293細胞系(293-hDLL4)和雙靶向抗體反應并在步驟(a)中培養的HUVEC中進行處理以實現共培養。