[發明專利]具有改進活性的DNA聚合酶

在審

• 申請號: 201380065298.8
• 申請日: 2013-12-11
• 公開（公告）號: CN104854237A
• 公開（公告）日: 2015-08-19
• 發明（設計）人: S.蘇科
• 申請（專利權）人: 霍夫曼－拉羅奇有限公司
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 杜艷玲;黃希貴

1.與對照DNA聚合酶相比具有增加的逆轉錄酶效率的DNA聚合酶，其中所述DNA聚合酶的與SEQ?ID?NO:1的位置763對應的氨基酸是除了M或I以外的任意氨基酸，且其中除了所述對照DNA聚合酶的與SEQ?ID?NO:1的位置763對應的氨基酸是M或I以外，所述對照DNA聚合酶具有與所述DNA聚合酶相同的氨基酸序列。

2.根據權利要求1所述的DNA聚合酶，其中所述DNA聚合酶包含與選自以下的聚合酶具有至少80%、優選至少90%、更優選至少95%氨基酸序列同一性的氨基酸序列：

(a)棲熱菌屬種Z05?DNA聚合酶(Z05)?(SEQ?ID?NO:1)；

(b)水生棲熱菌(Thermus?aquaticus)DNA聚合酶(Taq)?(SEQ?ID?NO:2)；

(c)絲狀棲熱菌(Thermus?filiformis)DNA聚合酶(Tfi)?(SEQ?ID?NO:3)；

(d)黃棲熱菌(Thermus?flavus)DNA聚合酶(Tfl)?(SEQ?ID?NO:4)；

(e)棲熱菌屬種sps17?DNA聚合酶(Sps17)?(SEQ?ID?NO:5)；

(f)嗜熱棲熱菌(Thermus?thermophilus)DNA聚合酶(Tth)?(SEQ?ID?NO:6)；

(g)?Thermus?caldophilus?DNA聚合酶(Tca)?(SEQ?ID?NO:7)

(h)海棲熱袍菌(Thermotoga?maritima)DNA聚合酶(Tma)?(SEQ?ID?NO:34)；和

(i)那不勒斯棲熱袍菌(Thermotoga?neopolitana)DNA聚合酶(Tne)?(SEQ?ID?NO:35)。

3.根據權利要求1和2中的任一項所述的DNA聚合酶，其中所述DNA聚合酶包含與SEQ?ID?NO:1具有至少90%同一性的氨基酸序列。

4.根據權利要求1-3中的任一項所述的DNA聚合酶，其中所述DNA聚合酶的與SEQ?ID?NO:1的位置763對應的氨基酸是T。

5.根據權利要求1-4中的任一項所述的DNA聚合酶，其中所述與SEQ?ID?NO:1的位置580對應的氨基酸是除了D以外的任意氨基酸。

6.根據權利要求1-5中的任一項所述的DNA聚合酶，其中所述與SEQ?ID?NO:1的位置580對應的氨基酸選自L、G、T、Q、A、S、N、R和K。

7.根據權利要求1-6中的任一項所述的DNA聚合酶，其中所述與SEQ?ID?NO:1的位置709對應的氨基酸是除了I以外的任意氨基酸。

8.根據權利要求1-7中的任一項所述的DNA聚合酶，其中所述與SEQ?ID?NO:1的位置709對應的氨基酸選自K、R、S、G和A。

9.根據權利要求1-8中的任一項所述的DNA聚合酶，其中所述與SEQ?ID?NO:1的位置763對應的氨基酸是T，與SEQ?ID?NO:1的位置709對應的氨基酸是K，且與SEQ?ID?NO:1的位置580對應的氨基酸是G。

10.根據權利要求1-9中的任一項所述的DNA聚合酶，其中與所述對照DNA聚合酶相比，所述DNA聚合酶具有相同或基本上相似的DNA依賴性的聚合酶活性。

11.一種重組核酸，其編碼根據權利要求1-10中的任一項所述的DNA聚合酶。

12.一種表達載體，其包含權利要求11的重組核酸。

13.一種宿主細胞，其包含權利要求12的表達載體。

14.一種生產DNA聚合酶的方法，所述方法包括：

在適合于表達編碼DNA聚合酶的核酸的條件下，培養權利要求13的宿主細胞。

15.一種進行引物延伸的方法，所述方法包括：

在適合于延伸引物的條件下，使如權利要求1?-?10之一中所述的DNA聚合酶與引物、多核苷酸模板和核苷三磷酸接觸，由此產生延伸的引物。