[發明專利]細胞介導的免疫應答試驗

有效

• 申請號: 201380065249.4
• 申請日: 2013-12-20
• 公開（公告）號: CN105051537B
• 公開（公告）日: 2019-04-12
• 發明（設計）人: J·伯勒;A·奈茨;C·穆尼安
• 申請（專利權）人: 塞爾雷斯蒂斯有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/50;C12Q1/68
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 余穎;陶家蓉

本公開內容一般涉及基于免疫學的診斷試驗領域，所述基于免疫學的診斷試驗包括檢測細胞介導的免疫應答力試驗。本發明教導了基于細胞介導的免疫應答診斷對象對抗原的暴露，其具有增強的靈敏度，且通過在樣品與抗原孵育期間添加非還原糖來實現。

技術領域

本發明一般涉及基于免疫學的試驗領域，并描述了用于測量細胞介導的免疫應答力的方法。本發明教導了用于測定細胞介導的免疫應答活性的方法、組合物和試劑盒，其具有增強的靈敏性和改善的儲存穩定性。

發明背景

基于免疫學的診斷試驗在醫療領域具有廣泛應用。具體而言，其是輔助檢測和監測多種疾病病癥的重要工具。這些試驗類型的效果部分在于免疫系統內組分(如T淋巴細胞)的特異性。盡管有這樣的特異性，但對于在具有活性或潛伏感染疾病狀態的對象或表現出免疫缺陷或任何形式的免疫抑制的對象中檢測感染、檢測是否存在低級感染(持續低水平感染)而言，基于免疫學的診斷不總是足夠靈敏的。細胞介導的免疫應答試驗的所需性能特征，尤其是對于檢測抗原特異性T細胞應答而言，包括合適的靈敏性、特異性、可靠性和再現性，此外還應簡單和快速地進行操作。

一種已建立的基于免疫學的診斷試驗形式涉及使用抗原刺激T細胞或免疫系統的其他細胞，隨后檢測應答抗原刺激而生成的免疫效應分子(如IFN-γ或其他細胞因子)。使用熟知的技術檢測免疫效應分子，如酶免疫試驗、多元珠分析、ELISA、ELISpot和流式細胞術。還可基于RNA水平測定免疫效應分子是否存在或其水平的升高。這類試驗可例如用于檢測疾病特異性免疫應答，特別是病原體特異性免疫應答。各試驗在商標QuantiFERON(注冊商標，塞爾雷斯蒂斯有限公司(Cellestis Limited))下市售可得且可例如用于診斷病原體感染或監測針對疾病的細胞介導的免疫。

各細胞介導的免疫應答試驗的其他應用包括分析或監測針對疫苗或免疫治療(如癌癥免疫治療)的細胞免疫應答。

非常需要具有增強的靈敏性的各試驗。先前，通過將樣品(如全血樣品)與抗原在單糖(如右旋糖)存在的情況下進行孵育來改善用于測量細胞介導的免疫應答的方法(參見例如WO 2004/042396 A1)。已發現，單糖(如右旋糖和葡萄糖)增加由免疫細胞產生的IFN-γ并由此改善試驗的靈敏性。對于允許細胞利用該能量源并因此受益于在與抗原孵育期間添加糖而言，單糖(如右旋糖和葡萄糖)的使用被認為是必要的。在除抗原外向樣品中直接添加單糖時，觀察到INF-γ水平的顯著升高。然而，為簡化方法的實施，優選提供即用型試劑組合物并避免手動操作步驟。因此，需要提供包含抗原和單糖的單個組合物。所述組合物可在樣品收集管中提供，其中樣品以正確濃度直接接觸抗原和單糖，從而避免操作誤差。然而在本文中發現，當包含抗原和單糖的各樣品收集管在室溫下或升高的溫度下儲存時，試驗活性隨時間減少。這發現于使用某些抗原時。因此，這些試劑盒組分的儲藏期有限，且在一段儲存時間后，該試驗僅提供低靈敏度或者甚至試驗活性完全喪失。因此，各試劑盒/試驗材料(其中在一個組合物中方便地提供抗原與單糖)不是儲存穩定的，且因此具有試驗靈敏度隨時間降低或甚至喪失的風險。當樣品收集管內未包含單糖與抗原，但單糖單獨地添加至樣品以與抗原孵育時，未觀察到上述現象。

本發明的目的是克服現有技術方法的至少一個缺陷。具體而言，本發明的目的是提供靈敏且可靠的方法來測量細胞介導的免疫應答以及儲存穩定的試劑盒和試劑盒組分。

發明內容