[發明專利]新重組因子C、其制造方法、及內毒素的測定法

在審

• 申請號: 201380064649.3
• 申請日: 2013-12-10
• 公開（公告）號: CN104919046A
• 公開（公告）日: 2015-09-16
• 發明（設計）人: 水村光;小田俊男;川畑俊一郞
• 申請（專利權）人: 生化學工業株式會社
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;C12N9/64;C12P21/02;C12Q1/37
• 代理公司: 北京林達劉知識產權代理事務所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

1.一種鱟的因子C，其具有因子C的活性。

2.根據權利要求1所述的因子C，其為重組蛋白。

3.根據權利要求1或2所述的因子C，其具有(α-2,3)鍵的末端唾液酸。

4.根據權利要求3所述的因子C，其與天然因子C相比具有較多的(α-2,3)鍵的末端唾液酸。

5.根據權利要求3或4所述的因子C，其與將Sf9用作宿主細胞所表達的鱟的因子C相比，具有較多的(α-2,3)鍵的末端唾液酸。

6.根據權利要求1～5中任一項所述的因子C，其在21mM的檸檬酸鈉的存在下顯示出10％以上的殘留活性。

7.根據權利要求1～6中任一項所述的因子C，其在非還原SDS-PAGE中測定的分子量為115kDa～140kDa。

8.根據權利要求7所述的因子C，其在非還原SDS-PAGE中測定的分子量為127kDa±5kDa。

9.根據權利要求1～8中任一項所述的因子C，其為下述(A)、(B)、(C)、或(D)所示的蛋白質：

(A)包含序列號2所示的氨基酸序列的蛋白質；

(B)包含在序列號2所示的氨基酸序列中含有一個或幾個氨基酸的置換、缺失、插入或添加的氨基酸序列、且具有因子C的活性的蛋白質；

(C)包含序列號4所示的氨基酸序列的蛋白質；

(D)包含在序列號4所示的氨基酸序列中含有一個或幾個氨基酸的置換、缺失、插入或添加的氨基酸序列、且具有因子C的活性的蛋白質。

10.根據權利要求1～8中任一項所述的因子C，其為下述(A)或(B)所示的蛋白質：

(A)包含序列號2所示的氨基酸序列的蛋白質；

(B)包含在序列號2所示的氨基酸序列中含有一個或幾個氨基酸的置換、缺失、插入或添加的氨基酸序列、且具有因子C的活性的蛋白質。

11.根據權利要求1～10中任一項所述的因子C，其為水溶性。

12.一種制造鱟的因子C的方法，該方法包括將哺乳類細胞用作宿主細胞而表達鱟的因子C。

13.根據權利要求12所述的方法，其中，所述哺乳類細胞為COS-1以外的哺乳類細胞。

14.根據權利要求12所述的方法，其中，所述哺乳類細胞為選自由除猴外的靈長類和嚙齒類組成的組中的哺乳動物的細胞。

15.根據權利要求12所述的方法，其中，所述哺乳類細胞為中國倉鼠的細胞或人的細胞。

16.根據權利要求12所述的方法，其中，所述哺乳類細胞為CHO或HEK。

17.根據權利要求12所述的方法，其中，所述哺乳類細胞為CHO?DG44或HEK293。

18.根據權利要求12～17中任一項所述的方法，其中，所述因子C為下述(A)、(B)、(C)或(D)所示的蛋白質：

(A)包含序列號2所示的氨基酸序列的蛋白質；

(B)包含在序列號2所示的氨基酸序列中含有一個或幾個氨基酸的置換、缺失、插入或添加的氨基酸序列、且具有因子C的活性的蛋白質；

(C)包含序列號4所示的氨基酸序列的蛋白質；

(D)包含在序列號4所示的氨基酸序列中含有一個或幾個氨基酸的置換、缺失、插入或添加的氨基酸序列、且具有因子C的活性的蛋白質。

19.根據權利要求12～17中任一項所述的方法，其中，所述因子C為下述(A)或(B)所示的蛋白質：

(A)包含序列號2所示的氨基酸序列的蛋白質；

(B)包含在序列號2所示的氨基酸序列中含有一個或幾個氨基酸的置換、缺失、插入或添加的氨基酸序列、且具有因子C的活性的蛋白質。

20.一種鱟的因子C，其可以利用權利要求12～19中任一項所述的方法制造。

21.根據權利要求20所述的因子C，其具有因子C的活性。

22.根據權利要求20或21所述的因子C，其具有(α-2,3)鍵的末端唾液酸。