[發明專利]一種純化治療性蛋白質的方法

有效

• 申請號: 201380063945.1
• 申請日: 2013-12-05
• 公開（公告）號: CN104981476B
• 公開（公告）日: 2018-10-09
• 發明（設計）人: H·法姆;J·M·黑;D·恩古
• 申請（專利權）人: 德國杰特貝林生物制品有限公司
• 主分類號: C07K1/20
• 分類號: C07K1/20;C07K1/18;C07K14/75;C07K14/755;A61K38/36;A61K38/37
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 張敏

1.一種減少包含纖維蛋白原的溶液中至少一種選自纖維蛋白溶酶原和t-PA的蛋白酶水平的方法，該方法包含：

(i)將包含纖維蛋白原的原料應用到在6.5至8.5的pH平衡的疏水電荷誘導色譜樹脂，其中所述疏水電荷誘導色譜樹脂包含選自巰基乙基吡啶、正己胺和苯丙胺的配基，并且其中一旦應用到所述樹脂，所述蛋白酶結合至所述樹脂上，而所述纖維蛋白原在未結合的流經級分中通過所述樹脂；和

(ii)回收通過所述樹脂的包含纖維蛋白原的溶液；

其中所述回收的溶液中的所述至少一種選自纖維蛋白溶酶原和t-PA的蛋白酶的濃度相比于原料減少了至少50％。

2.一種減少包含纖維蛋白原的溶液中至少一種選自纖維蛋白溶酶原和t-PA的蛋白酶水平的方法，該方法包含：

(i)將包含纖維蛋白原的原料應用到在6.5至8.5的pH平衡的第一疏水電荷誘導色譜樹脂；

(ⅱ)回收通過所述第一疏水電荷誘導色譜樹脂的包含纖維蛋白原的溶液；

(ⅲ)將在步驟(ii)中回收的溶液應用到在6.5至8.5的pH平衡的第二疏水電荷誘導色譜樹脂；和

(iv)回收通過所述第二疏水電荷誘導色譜樹脂的包含纖維蛋白原的溶液；

其中所述疏水電荷誘導色譜樹脂包含選自巰基乙基吡啶、正己胺和苯丙胺的配基，并且其中一旦分別將所述纖維蛋白原原料和溶液應用到所述第一和第二樹脂，所述蛋白酶結合至所述第一和第二樹脂上，而所述纖維蛋白原在未結合的流經級分中通過所述第一和第二樹脂，和在步驟(iv)回收的溶液中蛋白酶的濃度相比于原料減少了至少50％。

3.權利要求2的方法，其中第一和第二疏水電荷誘導色譜樹脂是相同的。

4.權利要求1的方法，進一步包含使在步驟(ii)中回收的包含纖維蛋白原的溶液通過陰離子交換色譜樹脂。

5.權利要求2的方法，進一步包括使在步驟(ii)和/或步驟(iv)中回收的包含纖維蛋白原的溶液通過陰離子交換色譜樹脂。

6.權利要求1的方法，進一步包含在步驟(ⅰ)之前使所述包含纖維蛋白原的原料通過陰離子交換色譜樹脂。

7.權利要求4的方法，其中所述陰離子交換樹脂是強陰離子交換樹脂。

8.權利要求4的方法，其中在170mM至230mM NaCl存在下，使所述包含纖維蛋白原的溶液通過陰離子交換色譜樹脂。

9.權利要求4的方法，其中所述纖維蛋白原是用包含從150mM至190mM NaCl的洗脫緩沖液從所述陰離子交換色譜樹脂上洗脫的。

10.權利要求7的方法，其中所述纖維蛋白原是用包含1-3％w/v濃度游離氨基酸的洗脫緩沖液從所述陰離子交換色譜樹脂上洗脫的。

11.權利要求10的方法，其中所述游離氨基酸是精氨酸。

12.權利要求1的方法，其中該包含纖維蛋白原的原料在步驟(ⅰ)之前進行病毒滅活步驟。

13.權利要求1的方法，其中步驟(ii)中從疏水電荷誘導色譜樹脂回收的包含纖維蛋白原的溶液進行病毒滅活步驟。

14.權利要求4的方法，其中所述包含纖維蛋白原的原料或溶液在通過陰離子交換色譜樹脂之前進行病毒滅活步驟。

15.權利要求12的方法，其中所述病毒滅活步驟包含巴氏滅菌法或用有機溶劑和清潔劑處理。

16.權利要求1的方法，其中該包含纖維蛋白原的原料是溶解的血漿冷沉淀物。