[發明專利]用于提高表達的細菌提取物中選定蛋白的蛋白水解失活

有效

• 申請號: 201380063443.9
• 申請日: 2013-10-08
• 公開（公告）號: CN104837863B
• 公開（公告）日: 2018-06-19
• 發明（設計）人: 克里斯托弗·D·薩諾斯;克里斯托弗·J·默里;楊俊豪;希瑟·斯蒂芬森
• 申請（專利權）人: 蘇特羅生物制藥公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C12N9/50
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

1.功能性釋放因子1蛋白(RF1)，其可被外膜蛋白T1(OmpT1)切割，其中可切斷的OmpT1肽鍵位于對應于野生型RF1(SEQ ID NO:1)的氨基酸287-304的轉換環區中，并且其中所述轉換環區被修飾為包含三個相鄰堿性氨基酸，所述堿性氨基酸在pH7.0下帶正電荷。

2.如權利要求1所述的RF1蛋白，其中所述三個相鄰堿性氨基酸獨立選自包括以下的組：精氨酸和賴氨酸。

3.如權利要求1所述的RF1蛋白，其中所述轉換環區被修飾為具有至少兩個另外的相鄰堿性氨基酸。

4.如權利要求1所述的RF1蛋白，其中第296位的天然天冬酰胺被取代為所述三個相鄰堿性氨基酸之一。

5.如權利要求1所述的RF1蛋白，其中當修飾的和野生型蛋白以相似濃度存在于來自表達OmpT1的細菌的無細胞提取物中時，于30℃、30分鐘后，OmpT1的切割活性大于野生型RF1(SEQ ID NO:1)的50％。

6.如權利要求1所述的RF1蛋白，其中所述轉換環區包含選自由以下組成的序列的組的氨基酸序列：

QQAEASTRRKLLGSGDRS(SEQ ID NO:5)，

QQAEASTRRRLLGSGDRS(SEQ ID NO:6)，

QQAEASTRRKKLGSGDRS(SEQ ID NO:12)，

QQAEASTRRKRLGSGDRS(SEQ ID NO:13)，

QQAEASTRRKVLGSGDRS(SEQ ID NO:14)，

QQAEASTRRRKLGSGDRS(SEQ ID NO:15)，

QQAEASTRRRRLGSGDRS(SEQ ID NO:16)，

QQAEASTRRRVLGSGDRS(SEQ ID NO:17)，

QQAEASTRRKKKGSGDRS(SEQ ID NO:18)，

QQAEASTRRKKRGSGDRS(SEQ ID NO:19)，

QQAEASTRRKRKGSGDRS(SEQ ID NO:20)，

QQAEASTRRKRRGSGDRS(SEQ ID NO:21)，

QQAEASTRRRRRGSGDRS(SEQ ID NO:22)，

QQAEASTRRRKRGSGDRS(SEQ ID NO:23)，

QQAEASTRRRRKGSGDRS(SEQ ID NO:24)，和

QQAEASTRRRKKGSGDRS(SEQ ID NO:25)。