[發(fā)明專利]基于PCR用于平行檢測生物材料的測定

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380061190.1
• 申請日: 2013-10-22
• 公開（公告）號(hào): CN104812915A
• 公開（公告）日: 2015-07-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王林發(fā);黃英勇;奧克托布爾·邁克爾·塞申斯;達(dá)尼埃爾·伊麗莎白·安德森
• 申請（專利權(quán)）人: 新加坡國立大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;G01N33/53;C07K19/00
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 鄭斌;彭鯤鵬

1.用于檢測和/或量化樣品中至少一種靶分子的探針，其包含：

a)對所述靶分子之一具有特異性的至少一種結(jié)合伴侶；以及與其連接的

b)寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含：

i)第一序列，其與用于擴(kuò)增所述寡核苷酸的正向引物序列互補(bǔ)；

ii)第二序列，其與用于擴(kuò)增所述寡核苷酸的反向引物序列互補(bǔ)；

和

iii)位于所述第一序列和所述第二序列之間的是核苷酸鑒定序列或條形碼，其中所述條形碼充當(dāng)所述靶分子的指示物并且由一定數(shù)目的以獨(dú)特順序排列的核苷酸組成，并且進(jìn)一步，其中由所述核苷酸的數(shù)目和性質(zhì)提供的所述核苷酸的獨(dú)特排列的數(shù)目大于所述樣品中靶分子的數(shù)目。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的探針，其中所述結(jié)合伴侶具有對所述靶分子具有特異性的多種表位。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的探針，其中所述結(jié)合伴侶本身包含至少一種肽和/或蛋白質(zhì)，所述肽和/或蛋白質(zhì)包含至少一種對待檢測的所述靶分子具有特異性的表位。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的探針，其中所述結(jié)合伴侶包含多種表位。

5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的探針，其中所述核苷酸鑒定序列或條形碼包含若干個(gè)核苷酸，所述若干個(gè)核苷酸選自18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6和5個(gè)核苷酸。

6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的探針，其中所述核苷酸鑒定序列或條形碼包括或包含至少一個(gè)用于切割所述核苷酸鑒定序列或條形碼的限制性酶切位點(diǎn)。

7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的探針，其中所述探針還具有有助于在多重測定中鑒定所述靶分子的至少一種另外的標(biāo)簽或標(biāo)記。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的探針，其中所述標(biāo)簽或標(biāo)記可通過PCR擴(kuò)增并且因此包含短DNA序列。

9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的探針，其中所述標(biāo)簽或標(biāo)記在遠(yuǎn)離所述結(jié)合伴侶的位點(diǎn)處與所述探針連接。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的探針，其中將所述標(biāo)簽或標(biāo)記并入寡核苷酸b)的所述引物序列i)或ii)的至少之一中。

11.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的探針，其中所述靶分子選自：肽、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或碳水化合物。

12.用于在多重測定中檢測至少一個(gè)樣品中的至少一種靶分子的多種探針，其中每種探針包含：

a)對至少一種所述靶分子具有特異性的至少一種結(jié)合伴侶；以及與其連接的

b)寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含：

i)第一序列，其與用于擴(kuò)增所述寡核苷酸的正向引物序列互補(bǔ)；

ii)第二序列，其與用于擴(kuò)增所述寡核苷酸的反向引物序列互補(bǔ)；

和

iii)位于所述第一序列和所述第二序列之間的核苷酸鑒定序列或條形碼，其中所述條形碼充當(dāng)所述靶分子的指示物并且由一定數(shù)目的以獨(dú)特順序排列的核苷酸組成，并且進(jìn)一步，其中由所述核苷酸的數(shù)目和性質(zhì)提供的所述核苷酸的獨(dú)特排列的數(shù)目大于所述樣品中靶分子的數(shù)目；以及

c)有助于在多重測定中鑒定所述靶分子的標(biāo)簽或標(biāo)記。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的多種探針，其中所述第一序列和所述第二序列是多種探針共有的。

14.根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的多種探針，其中至少兩種所述探針具有不同結(jié)合伴侶，從而可鑒定至少一個(gè)樣品中的多種不同靶分子。

15.根據(jù)權(quán)利要求12至14中任一項(xiàng)所述的多種探針，其中用于檢測特定類型或組的靶分子的探針具有第一共有所述標(biāo)簽或標(biāo)記；或者用于檢測另一特定類型或組的靶分子的探針具有第二共有所述標(biāo)簽或標(biāo)記；或者用于鑒定特定樣品的探針具有另一共有所述標(biāo)簽或標(biāo)記。

16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的多種探針，其中所述標(biāo)簽或標(biāo)記是在寡核苷酸b)的引物區(qū)i)或ii)的至少之一或兩者中提供的短核苷酸序列。

17.根據(jù)權(quán)利要求12至16中任一項(xiàng)所述的多種探針，其中所述靶分子選自：肽、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或碳水化合物。