[發(fā)明專利]賦予玉蜀黍?qū)τ衩赘xIl的抗性的組合物和方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380060330.3
• 申請日: 2013-09-20
• 公開（公告）號(hào): CN105008540A
• 公開（公告）日: 2015-10-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: G.S.喬哈爾;李柏林;D.S.穆爾塔尼
• 申請（專利權(quán)）人: 納幕爾杜邦公司;先鋒國際良種公司;普渡研究基金會(huì)
• 主分類號(hào): C12N15/82
• 分類號(hào): C12N15/82;C12N15/87;A01H5/00;C12N5/04;C12N5/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 鄒雪梅;彭昶

1.一種增強(qiáng)植物對昆蟲害植食性的抗性的方法，包括：

(a)向可再生植物細(xì)胞中引入重組DNA構(gòu)建體，所述重組DNA構(gòu)建體包含有效連接到至少一個(gè)調(diào)控序列的多核苷酸，其中所述多核苷酸編碼具有這樣的氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列基于Clustal?W比對方法與SEQ?ID?NO：2、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、20、22和23相比具有至少80％的序列同一性；以及

(b)在步驟(a)后從所述可再生植物細(xì)胞再生出轉(zhuǎn)基因植物，其中所述轉(zhuǎn)基因植物在其基因組中包含所述重組DNA構(gòu)建體并表現(xiàn)出與不包含所述重組DNA構(gòu)建體的對照植物相比增強(qiáng)的對植物害蟲的抗性。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，還包括：

(c)獲得源自所述轉(zhuǎn)基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因組中包含所述重組DNA構(gòu)建體并表現(xiàn)出與不包含所述重組DNA構(gòu)建體的對照植物相比增強(qiáng)的對昆蟲害蟲植食性的抗性。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述昆蟲害蟲為鞘翅目(Coleopteran)昆蟲。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述昆蟲害蟲為鱗翅目(Lepidopteran)昆蟲。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述植物為單子葉植物。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述單子葉植物為玉蜀黍。

7.一種鑒定賦予植物對昆蟲害蟲植食性的增強(qiáng)抗性的Crw2變體的方法，所述方法包括以下步驟：

a.通過基因改組將一個(gè)或多個(gè)核苷酸序列合并，所述一個(gè)或多個(gè)核苷酸序列編碼SEQ?ID?NO：2的一個(gè)或多個(gè)片段，或與SEQ?ID?NO：2具有至少70％同一性的蛋白質(zhì)或其片段；

b.將來自步驟(a)的所述改組序列轉(zhuǎn)化進(jìn)可再生植物細(xì)胞的群體；

c.從步驟(b)的轉(zhuǎn)化的可再生植物細(xì)胞的群體再生出轉(zhuǎn)化植物的群體；

d.從來自步驟(c)的轉(zhuǎn)化植物的群體篩選對所述昆蟲害蟲增強(qiáng)的抗性；以及

e.從所述轉(zhuǎn)化植物中鑒定出表現(xiàn)所述增強(qiáng)的抗性的變體。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述方法還包括以下步驟：

f.向可再生植物細(xì)胞引入重組構(gòu)建體，所述重組構(gòu)建體包含通過權(quán)利要求7所述的方法鑒定出的Crw2變體；

g.在步驟(f)后從所述可再生植物細(xì)胞再生出轉(zhuǎn)基因植物，其中所述轉(zhuǎn)基因植物在其基因組中包含所述重組DNA構(gòu)建體；以及

h.選擇(g)的轉(zhuǎn)基因植物，其中所述轉(zhuǎn)基因植物包含所述重組DNA構(gòu)建體并表現(xiàn)出與不包含所述重組DNA構(gòu)建體的對照植物相比增強(qiáng)的對所述昆蟲害蟲的抗性。

9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的方法，其中所述昆蟲害蟲為鞘翅目(Coleopteran)昆蟲。

10.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的方法，其中所述昆蟲害蟲為鱗翅目(Lepidopteran)昆蟲。

11.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的方法，其中所述植物為單子葉植物。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述單子葉植物為玉蜀黍。

13.一種鑒定玉蜀黍植物中的Crw2等位基因變體的方法，其中所述等位基因變體與對昆蟲害蟲植食性的抗性增強(qiáng)相關(guān)，所述方法包括以下步驟：

a.獲得玉蜀黍植物的群體，其中所述玉蜀黍植物表現(xiàn)出對所述昆蟲害蟲的不同抗性水平；

b.關(guān)于編碼包含SEQ?ID?NO：2的蛋白質(zhì)的多核苷酸序列、或在調(diào)控編碼所述蛋白質(zhì)的多核苷酸的表達(dá)的基因組區(qū)中評價(jià)等位基因變異；

c.將等位基因變異與所述抗性相關(guān)聯(lián)；以及

d.鑒定出與對所述昆蟲害蟲的抗性增強(qiáng)相關(guān)聯(lián)的等位基因變體。

14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述昆蟲害蟲為鞘翅目(Coleopteran)昆蟲。

15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述昆蟲害蟲為鱗翅目(Lepidopteran)昆蟲。