[發(fā)明專利]賦予玉蜀黍對玉米根蟲I的抗性的組合物和方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380060315.9
• 申請日: 2013-09-20
• 公開（公告）號: CN104812903A
• 公開（公告）日: 2015-07-29
• 發(fā)明（設計）人: D.S.穆爾塔尼;G.S.喬哈爾;B.K.P.文卡塔
• 申請（專利權）人: 先鋒國際良種公司;普渡研究基金會
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/87;A01H5/00;C12N5/04;C12N5/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 鄒雪梅;李炳愛

1.一種在植物中提高對昆蟲害蟲植食性的抗性的方法，包括：

(a)將重組DNA構建體引入進可再生的植物細胞中，所述重組DNA構建體包含與至少一個調控序列有效連接的多核苷酸，其中所述多核苷酸編碼具有這樣的氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列基于Clustal?W比對方法，當與SEQ?ID?NO：3、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26或27比較時，具有至少80％的序列同一性；以及

(b)在步驟(a)之后從所述可再生的植物細胞再生出轉基因植株，其中所述轉基因植株在其基因組中包含所述重組DNA構建體并且當與不包含所述重組DNA構建體的對照植株比較時展現出提高的對植物害蟲的抗性。

2.根據權利要求1所述的方法，還包括：

(c)獲得源自所述轉基因植株的子代植株，其中所述子代植株在其基因組中包含所述重組DNA構建體并且當與不包含所述重組DNA構建體的對照植株比較時展現出提高的對昆蟲害蟲植食性的抗性。

3.根據權利要求1所述的方法，其中所述至少一個調控元件是啟動子。

4.根據權利要求3所述的方法，其中所述啟動子是根特異性啟動子或玉蜀黍泛素啟動子。

5.根據權利要求1所述的方法，其中所述昆蟲害蟲為鞘翅目(Coleopteran)昆蟲。

6.根據權利要求5所述的方法，其中所述昆蟲害蟲屬于根葉甲屬(Diabrotica)。

7.根據權利要求1所述的方法，其中所述植物是單子葉植物。

8.根據權利要求9所述的方法，其中所述單子葉植物是玉蜀黍。

9.一種鑒定賦予植物提高的對昆蟲害蟲植食性的crw1的抗性的變體的方法，所述方法包括如下步驟：

a.通過基因改組將一種或多種核苷酸序列組合在一起以產生Crw1的變體，所述一種或多種核苷酸序列編碼SEQ?ID?NO：3的一個或多個片段或與SEQ?ID?NO：3或其片段具有70％同一性的蛋白質的一個或多個片段；以及

b.鑒定展現出所述提高的抗性的變體。

10.根據權利要求9所述的方法，其中所述方法還包括如下步驟：

a.將包含通過權利要求9的方法鑒定的Crw1的變體的重組構建體引入進可再生的植物細胞中；

b.在步驟(a)之后從所述可再生的植物細胞再生出轉基因植株，其中所述轉基因植株在其基因組中包含所述重組DNA構建體；以及

c.選擇(b)的轉基因植株，其中所述轉基因植株包含所述重組DNA構建體并且當與不包含所述重組DNA構建體的對照植株比較時展現出提高的對所述昆蟲害蟲的抗性。

11.根據權利要求9或10所述的方法，其中所述昆蟲害蟲為鞘翅目昆蟲。

12.根據權利要求11所述的方法，其中所述昆蟲害蟲屬于根葉甲屬。

13.根據權利要求9或10所述的方法，其中所述植物是單子葉植物。

14.根據權利要求13所述的方法，其中所述單子葉植物是玉蜀黍。

15.一種鑒定玉蜀黍植株中的Crw1的等位基因變體的方法，其中所述等位基因變體與提高的對昆蟲害蟲植食性的抗性相關，所述方法包括如下步驟：

a.獲得玉蜀黍植株的群體，其中所述玉蜀黍植株展現出不同水平的對所述昆蟲害蟲的抗性；

b.針對編碼包含SEQ?ID?NO：3的蛋白質的多核苷酸序列，或者在調節(jié)編碼所述蛋白質的多核苷酸的表達的基因組區(qū)域中，評估等位基因變異；

c.將等位基因變異與所述抗性關聯(lián)；以及

d.鑒定與提高的對所述昆蟲害蟲的抗性相關的等位基因變體。

16.根據權利要求15所述的方法，其中所述昆蟲害蟲為鞘翅目昆蟲。

17.根據權利要求16所述的方法，其中所述昆蟲害蟲屬于根葉甲屬。