[發(fā)明專利]細(xì)胞制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201380060122.3
• 申請(qǐng)日: 2013-09-17
• 公開（公告）號(hào): CN104797134B
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 阿爾伯特·P·李
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 阿爾伯特·P·李
• 主分類號(hào): A01N1/02
• 分類號(hào): A01N1/02;C12N5/071
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司31100
• 代理人: 楊昀,沈端

1.一種制備冷凍保存的人肝細(xì)胞的不用離心的方法，所述人肝細(xì)胞由來自多個(gè)個(gè)體的肝細(xì)胞組成，所述方法包括：

a)在針對(duì)多個(gè)個(gè)體各自分開的器皿內(nèi)冷凍保存肝細(xì)胞懸液中來自所述多個(gè)個(gè)體的肝臟的肝細(xì)胞；

b)使來自多個(gè)個(gè)體的所述肝細(xì)胞懸液的分開的器皿在37℃水浴中解凍直至所述肝細(xì)胞懸液達(dá)到4℃的溫度，僅至所述肝細(xì)胞懸液中的冰晶剛剛消失為止，并使所述肝細(xì)胞懸液維持在4℃的溫度；

c)將所述分開的器皿的來自多個(gè)個(gè)體的肝細(xì)胞懸液匯集在一個(gè)容器中，其中，該匯集的肝細(xì)胞懸液維持在4℃的溫度；

d)將匯集的肝細(xì)胞懸液分配進(jìn)入多個(gè)器皿；和

e)將匯集的肝細(xì)胞懸液的多個(gè)器皿冷凍保存，其中，步驟b)、c)、d)和e)的進(jìn)行不用稀釋或更換所述肝細(xì)胞懸液；

其中，所述肝細(xì)胞懸液包含冷凍保護(hù)劑。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述冷凍保護(hù)劑包含Dulbecco改良型伊格爾培養(yǎng)基：補(bǔ)充有10％胎牛血清和10％二甲亞砜(DMSO)的營(yíng)養(yǎng)混合物F-12(DMEM/F12)培養(yǎng)基。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述肝細(xì)胞的冷凍保存包括以-1℃/分鐘的速率冷凍保存所述肝細(xì)胞至-70℃。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法還包括在冷凍貯存系統(tǒng)中貯存所述冷凍保存的匯集的肝細(xì)胞。

5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述肝細(xì)胞的貯存包括在-150℃或更低的溫度下貯存。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法還包括從多個(gè)個(gè)體的肝臟分離肝細(xì)胞。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法還包括解凍所述冷凍保存的匯集的肝細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。