[發明專利]雙酶促擴增有效

申請號：	201380049399.6	申請日：	2013-07-18
公開（公告）號：	CN104736719A	公開（公告）日：	2015-06-24
發明（設計）人：	W.M.斯特勞斯	申請（專利權）人：	辛溫尼奧生物系統公司
主分類號：	C12Q1/48	分類號：	C12Q1/48;C12Q1/68;C12N9/10
代理公司：	中國專利代理(香港)有限公司 72001	代理人：	李慧惠;黃希貴
地址：	美國加利***	國省代碼：	美國;US
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摘要：
搜索關鍵詞：	雙酶促擴增
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【權利要求書】：

1.用于驗證稀有細胞群體的細胞中的基因組突變的存在的方法，其包括：

a)?用第一DNA聚合酶擴增所述稀有細胞群體的細胞的部分或整個基因組；

b)?用第二DNA聚合酶擴增所述稀有細胞群體的細胞的部分或整個基因組，其中所述第二DNA聚合酶不同于所述第一DNA聚合酶；

c)?比較步驟a)和b)中獲得的擴增的基因組序列與從包含正常體細胞基因組DNA的細胞的對照群體獲得的未擴增的基因組序列，其中在步驟a)和b)中獲得的基因組序列中相同、但與獲得未擴增的基因組序列的基因組序列中的相同核苷酸位置處的核苷酸多態性不同的核苷酸多態性的鑒定驗證所述稀有細胞群體的細胞中的基因組突變的存在。

2.權利要求1的方法，其中所述擴增和未擴增的基因組序列通過一種或多種程序進行比較，所述程序包括測序、擴增和/或雜交。

3.權利要求1-2中任一項的方法，其中所述基因組突變的存在或不存在通過PCR檢測。

4.權利要求1-2中任一項的方法，其中所述基因組突變的存在或不存在通過微陣列檢測。

5.權利要求1-2中任一項的方法，其中所述基因組突變的存在或不存在通過測序檢測。

6.用于驗證稀有細胞群體的細胞中的基因組突變的存在的方法，其包括：

a)?用第一DNA聚合酶擴增和測序所述稀有細胞群體的細胞的部分或整個基因組；

b)?用第二DNA聚合酶擴增和測序所述稀有細胞群體的細胞的部分或整個基因組，其中所述第二DNA聚合酶不同于所述第一DNA聚合酶；

c)?測序而不擴增包含正常體細胞基因組DNA的對照細胞群體的部分或整個基因組；

d)?比較步驟a)、b)和c)中獲得的基因組序列，其中在步驟a)和b)中獲得的基因組序列中相同、但與步驟c)中獲得的基因組序列中的相同核苷酸位置處的核苷酸多態性不同的核苷酸多態性的鑒定驗證所述稀有細胞群體的細胞中的基因組突變的存在。

7.權利要求1-6中任一項的方法，其中所述第一DNA聚合酶和所述第二DNA聚合酶具有不同的糾錯率。

8.權利要求1-7中任一項的方法，其中所述第一DNA聚合酶和所述第二DNA聚合酶具有不同的核酸拷貝保真度。

9.權利要求1-8中任一項的方法，其中所述第一DNA聚合酶和/或所述第二DNA聚合酶具有5′→?3′外切核酸酶活性。

10.權利要求1-9中任一項的方法，其中所述第一DNA聚合酶和/或所述第二DNA聚合酶不具有3′→?5′外切核酸酶活性。

11.權利要求1-10中任一項的方法，其中所述第一DNA聚合酶和/或所述第二DNA聚合酶具有解旋酶和/或鏈置換活性。

12.權利要求1-11中任一項的方法，其中所述第一DNA聚合酶和所述第二DNA聚合酶選自Φ29?DNA聚合酶、水生棲熱菌(Thermus?aquaticus)?(Taq)?DNA聚合酶、黃棲熱菌(Thermus?flavus)?(Tfl)?DNA聚合酶、嗜熱棲熱菌(Thermus?thermophilus)?(rTth)?DNA聚合酶、Thermus?litoris?(Tli)?DNA聚合酶、海棲熱袍菌(Thermotoga?maritima)?(Tma)?DNA聚合酶、激烈熱球菌(Pyrococcus?furiosus)?(Pfu)?DNA聚合酶、嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillus?stearothermophilus)?(Bst)?DNA聚合酶、PHUSION^?高保真DNA聚合酶、Vent_R^??DNA聚合酶、Deep?Vent_R??DNA聚合酶、Q5?高保真DNA聚合酶和REPLI-g?DNA聚合酶。