[發(fā)明專利]用于對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)物控釋培養(yǎng)組分的微量滴定板

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201380048115.1
• 申請(qǐng)日: 2013-09-20
• 公開（公告）號(hào): CN104781385A
• 公開（公告）日: 2015-07-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: J·陳;R·E·穆爾;W·特隆德賽
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 丹尼斯科美國公司
• 主分類號(hào): C12M1/00
• 分類號(hào): C12M1/00;C12M1/32
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所 11247
• 代理人: 張莉;黃革生

相關(guān)專利申請(qǐng)的交叉引用

本申請(qǐng)要求2012年9月20日提交的美國臨時(shí)專利申請(qǐng)No.USSN61/703,394的權(quán)益，該臨時(shí)專利申請(qǐng)的內(nèi)容據(jù)此以引用方式全文并入。

背景技術(shù)

微量滴定板通常用于溫育和培養(yǎng)異源細(xì)胞或菌株庫。例如，可在單個(gè)96孔微量滴定板中通過在每個(gè)孔中培養(yǎng)不同的株系來比較96個(gè)細(xì)胞株的庫。因此，可在小格式中觀察細(xì)胞間的差異(例如，生長速率、碳利用率、群體密度、活力、蛋白質(zhì)產(chǎn)率以及抗生素抗性)。在常規(guī)的微量滴定板中，通常對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞分批提供固定量的碳和其他營養(yǎng)物質(zhì)。隨著細(xì)胞生長，營養(yǎng)物質(zhì)中的一者或多者可快速變成有限的或耗盡，并且在可觀察到細(xì)胞間的差異之前導(dǎo)致細(xì)胞減緩或停止生長。因此，常規(guī)的微量滴定板并不非常適于篩選細(xì)胞庫。

為了解決常規(guī)微量滴定板中的碳限制問題，開發(fā)了用于葡萄糖遞送的緩釋系統(tǒng)即“”技術(shù)(Jeude?et?al.,Biotechnol?Bioeng?95:433-445,2006(Jeude等人，《生物技術(shù)與生物工程》，第95卷，第433-445頁，2006年))以用于制備預(yù)培養(yǎng)物。盤(AdolfKühner?AG)為包埋有糖的有機(jī)硅盤。然而，盤具有若干局限性。第一，僅相對(duì)少量的糖可裝進(jìn)此類固相。第二，供培養(yǎng)物使用的糖的總量受到盤的幾何形狀的限制(該盤不包含用于持續(xù)生產(chǎn)的足夠的碳)。第三，在細(xì)胞量最低并且溢流代謝的風(fēng)險(xiǎn)最高的培養(yǎng)初期，來自此類固相的糖釋放速率最快。第四，由于例如可裝進(jìn)微珠的糖的量并且缺乏精確控制糖釋放的方法，因此該方法具有有限的可擴(kuò)展性。最后，盤或其他固定化控釋系統(tǒng)(例如，涂層、附件)在孔中的存在妨礙了篩選應(yīng)用中的批量移液。由于這些原因，該技術(shù)主要限于預(yù)培養(yǎng)物(Huber?et?al.,Biotechnol?Bioeng103:1095-1102,2009(Huber等人，《生物技術(shù)與生物工程》，第103卷，第1095-1102頁，2009年))。

附圖說明

圖1：(A)用于96孔控釋聚二甲基硅氧烷(PDMS)微量滴定板的CNC機(jī)加工模具的示意圖；(B)96孔柱模具；(C)24孔柱模具；(D)具有空氣管路的模具蓋。鋁模具中的凸起管路變?yōu)镻DMS?srMTP的底部中的半通道，然后用高粘性丙烯酸膜密封該半通道。空氣管路允許氧氣在板下方流動(dòng)，氧氣通過每個(gè)孔下方的400微米厚的區(qū)域擴(kuò)散，以提高對(duì)生長細(xì)胞的氧氣傳遞速率。

圖2：(A)PDMS微量滴定板中的葡萄糖釋放；(B)模塑有不同濃度的分批葡萄糖的板的srMTP孔中的葡萄糖濃度。

圖3：(A)芽孢桿菌屬(Bacillus)細(xì)胞在cMTP與srMTP中的生長；(B)芽孢桿菌屬菌株A在常規(guī)與緩釋PDMS?96孔微量滴定板中的生長；(C)芽孢桿菌屬菌株B在常規(guī)與緩釋PDMS?96孔微量滴定板中的生長；(D)芽孢桿菌屬菌株C在常規(guī)與緩釋PDMS?96孔微量滴定板中的生長；(E)芽孢桿菌屬菌株D在常規(guī)與緩釋PDMS?96孔微量滴定板中的生長。

圖4：(A)在常規(guī)與緩釋PDMS?96孔板中生長的芽孢桿菌屬菌株A的AAPF活性；(B)在常規(guī)與PDMS緩釋96孔板中生長的芽孢桿菌屬菌株B的AAPF活性；(C)在常規(guī)與PDMS緩釋96孔板中生長的芽孢桿菌屬菌株C的AAPF活性。

圖5：通過在cMTP與srMTP中生長的木霉屬(Trichoderma)變體進(jìn)行的玉米棒水解。

圖6：在PDMS?srMTP中在含有20％乳糖的確定成分培養(yǎng)基中(泳道1-4)生長的或在常規(guī)微量滴定板中在含有2.4％乳糖的確定成分培養(yǎng)基中(泳道5-8)生長的表達(dá)葡糖淀粉酶的木霉屬菌株的聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)。