[發(fā)明專(zhuān)利]經(jīng)遺傳修飾的非人動(dòng)物及其使用方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201380046265.9
• 申請(qǐng)日: 2013-09-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104955326B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: R·A·弗拉維爾;M·曼茨;A·龍沃;T·施特羅維希;T·維林格;A·J·墨菲;S·史蒂文斯;G·雅克波羅斯
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 再生元制藥公司;耶魯大學(xué);生物醫(yī)學(xué)研究院
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/12
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/12;C12N15/24;C12N15/27;A01K67/027
• 代理公司: 北京龍雙利達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11329
• 代理人: 肖鸝;毛威

1.一種用于生成經(jīng)遺傳修飾的小鼠的方法，所述方法包括：生成在它的基因組中包含重組活化基因2(Rag2)的基因敲除、IL2受體γ鏈(IL2rg)的基因敲除、編碼人M-CSF多肽的核酸在小鼠M-CSF基因基因座處對(duì)小鼠M-CSF基因的替換、編碼人IL-3多肽的核酸在小鼠IL-3基因基因座處對(duì)小鼠IL-3基因的替換、編碼人GM-CSF多肽的核酸在小鼠GM-CSF基因基因座處對(duì)小鼠GM-CSF基因的替換、編碼人SIRPA多肽的核酸的插入和編碼人TPO多肽的核酸在小鼠TPO基因基因座處對(duì)小鼠TPO基因的替換的經(jīng)遺傳修飾的小鼠，其中編碼人M-CSF多肽、人IL-3多肽、人GM-CSF多肽、人SIRPA多肽和人TPO多肽的核酸中每種與啟動(dòng)子可操作連接，且其中所述小鼠表達(dá)人M-CSF多肽、人IL-3多肽、人GM-CSF多肽、人SIRPA多肽和人TPO多肽。

2.一種用于生成移入有人造血干細(xì)胞和祖細(xì)胞(HSPC)的經(jīng)遺傳修飾的小鼠的方法，所述方法包括下述步驟：對(duì)經(jīng)遺傳修飾的小鼠施用至少一種人HSPC，其中所述經(jīng)遺傳修飾的小鼠在它的基因組中包含重組活化基因2(Rag2)的基因敲除、IL2受體γ鏈(IL2rg)的基因敲除、編碼人M-CSF多肽的核酸在小鼠M-CSF基因基因座處對(duì)小鼠M-CSF基因的替換、編碼人IL-3多肽的核酸在小鼠IL-3基因基因座處對(duì)小鼠IL-3基因的替換、編碼人GM-CSF多肽的核酸在小鼠GM-CSF基因基因座處對(duì)小鼠GM-CSF基因的替換、編碼人SIRPA多肽的核酸的插入和編碼人TPO多肽的核酸在小鼠TPO基因基因座處對(duì)小鼠TPO基因的替換，其中編碼人M-CSF多肽、人IL-3多肽、人GM-CSF多肽、人SIRPA多肽和人TPO多肽的核酸中每種與啟動(dòng)子可操作連接，且其中所述小鼠表達(dá)人M-CSF多肽、人IL-3多肽、人GM-CSF多肽、人SIRPA多肽和人TPO多肽。

3.權(quán)利要求2的方法，其中所述經(jīng)遺傳修飾的小鼠包含人癌細(xì)胞。

4.權(quán)利要求3的方法，其中所述人癌細(xì)胞是白血病細(xì)胞或黑素瘤細(xì)胞。

5.權(quán)利要求2的方法，其中在所述施用步驟之前沒(méi)有預(yù)先條件化照射所述經(jīng)遺傳修飾的小鼠或?qū)λ鼋?jīng)遺傳修飾的小鼠施用放射模擬藥物。

6.一種用于生成經(jīng)遺傳修飾的小鼠的方法，所述方法包括：生成在它的基因組中包含重組活化基因2(Rag2)的基因敲除、IL2受體γ鏈(IL2rg)的基因敲除、編碼人M-CSF多肽的核酸在小鼠M-CSF基因基因座處對(duì)小鼠M-CSF基因的替換、編碼人IL-3多肽的核酸在小鼠IL-3基因基因座處對(duì)小鼠IL-3基因的替換、編碼人GM-CSF多肽的核酸在小鼠GM-CSF基因基因座處對(duì)小鼠GM-CSF基因的替換、編碼人SIRPA多肽的核酸的插入和編碼人TPO多肽的核酸在小鼠TPO基因基因座處對(duì)小鼠TPO基因的替換的經(jīng)遺傳修飾的小鼠，

其中編碼人M-CSF多肽、人IL-3多肽、人GM-CSF多肽、人SIRPA多肽和人TPO多肽的核酸中每種與啟動(dòng)子可操作連接，

其中所述小鼠表達(dá)人M-CSF多肽、人IL-3多肽、人GM-CSF多肽、人SIRPA多肽和人TPO多肽，

且其中當(dāng)移入有人CD34+細(xì)胞時(shí)，所述小鼠展現(xiàn)血液和骨髓中相對(duì)于移入有人CD34+細(xì)胞的不表達(dá)人M-CSF多肽、人IL-3多肽、人GM-CSF多肽、人SIRPA多肽和人TPO多肽的經(jīng)遺傳修飾的小鼠顯著更高比例的人CD33+髓樣細(xì)胞。

7.權(quán)利要求6的方法，其中所述小鼠移入有人CD34+細(xì)胞。

8.權(quán)利要求7的方法，其中所述移入之前沒(méi)有預(yù)先條件化照射所述經(jīng)遺傳修飾的小鼠或?qū)λ鼋?jīng)遺傳修飾的小鼠施用放射模擬藥物。