[發明專利]生物合成1，3丁二烯的方法

在審

• 申請號: 201380043586.3
• 申請日: 2013-06-12
• 公開（公告）號: CN104769119A
• 公開（公告）日: 2015-07-08
• 發明（設計）人: P.S.珀爾曼;C.陳;A.博特斯;A.V.E.康拉德
• 申請（專利權）人: 英威達技術有限責任公司
• 主分類號: C12P5/02
• 分類號: C12P5/02;C12N9/00;C07C11/167;C12N9/02
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 張文輝

1.一種生物合成丁二烯的方法，所述方法包括在丁二烯合成底物中形成兩個末端乙烯基基團。

2.根據權利要求1所述的方法，其中第一個乙烯基基團在所述丁二烯合成底物中酶促形成以產生選自由以下組成的組的化合物：2-氧代戊-4-烯酸、丙烯基-CoA、(R)3-羥基戊-4-烯酸、2，4-戊二烯酰基-[acp]、2，4-戊二烯酰基-CoA、巴豆酰基-CoA和3-丁烯-2-醇。

3.根據權利要求1或權利要求2所述的方法，其中通過(i)使用分類為EC?4.1.1.77的4-草酰巴豆酸脫羧酶在4-草酰巴豆酸中，(ii)使用分類為EC?3.7.1.9的2-羥基粘康酸半醛水解酶在羥基粘康酸半醛中或(iii)使用分類為EC?3.7.1.14的2-羥基-6-氧代壬-2，4-二烯二酯水解酶在2-羥基-6-氧代壬-2，4-二烯-1，9-二酯中形成第一個乙烯基基團來生產2-氧代戊-4-烯酸。

4.根據權利要求2或3所述的方法，其中通過使用分類為EC?1.2.1.32的2氨基粘康酸半醛脫氫酶將2-羥基粘康酸半醛轉化為2-羥基粘康酸，使用分類為EC?5.3.2.6的2-羥基粘康酸互變異構酶將2-羥基粘康酸轉化為4-草酰巴豆酸和使用分類為EC?4.1.1.77的4-草酰巴豆酸脫羧酶將4-草酰巴豆酸轉化為2-氧代戊-4-烯酸來生產2-氧代戊-4-烯酸。

5.根據權利要求3或權利要求4所述的方法，其中通過使用分類為EC1.13.11.2的兒茶酚2，3-雙加氧酶將兒茶酚轉化為2-羥基粘康酸半醛來產生2-羥基粘康酸半醛。

6.根據權利要求5所述的方法，其中通過使用分類為EC?1.14.12.1的鄰氨基苯甲酸1，2-雙加氧酶轉化鄰氨基苯甲酸或使用分類為EC?4.1.1.63的原兒茶酸脫羧酶轉化原兒茶酸來生產兒茶酸。

7.根據權利要求6所述的方法，其中通過使用分類為EC?4.1.3.27的鄰氨基苯甲酸合酶轉化分支酸來生產鄰氨基苯甲酸。

8.根據權利要求5所述的方法，其中通過使用分類為EC?4.2.1.118的3-脫氫莽草酸脫水酶轉化3-脫氫莽草酸來產生原兒茶酸。

9.根據權利要求3或4所述的方法，其中通過使用5-羧基-2-羥基粘康酸-6-半醛脫羧酶轉化5-羧基-2-羥基粘康酸-6-半醛來產生2-羥基粘康酸半醛。

10.根據權利要求9所述的方法，其中所述5-羧基-2-羥基粘康酸-6-半醛脫羧酶由praH編碼。

11.根據權利要求8或9所述的方法，其中通過使用原兒茶酸2，3-雙加氧酶轉化原兒茶酸來生產5-羧基-2-羥基粘康酸-6-半醛。

12.根據權利要求11所述的方法，其中所述原兒茶酸2，3-雙加氧酶由praA編碼。

13.根據權利要求3所述的方法，其中通過使用分類為EC?1.13.11.16的3-羧乙基兒茶酚2，3-雙加氧酶轉化2，3-二羥基苯基丙酸來生產2-羥基-6-氧代壬-2，4-二烯-1，9-二酯。

14.根據權利要求13所述的方法，其中通過使用分類為EC?1.3.1.87的3-(順式-5，6-二羥基環己-1，3-二烯-1-基)丙酸脫氫酶轉化順式-3-(羧基-乙基)-3，5-環-己二烯-1，2-二醇來產生2，3-二羥基苯基丙酸。

15.根據權利要求14所述的方法，其中通過使用分類為EC?1.14.12.19的3-苯基丙酸雙加氧酶轉化3-苯基-丙酸來生產順式-3-(羧基-乙基)-3，5-環-己二烯-1，2-二醇。

16.根據權利要求15所述的方法，其中通過使用分類為EC?1.3.1.31的2-烯酸還原酶轉化E-肉桂酸來生產3-苯基-丙酸。

17.根據權利要求16所述的方法，其中通過使用分類為EC?4.3.1.24的苯丙氨酸解氨酶轉化L-苯丙氨酸來生產E-肉桂酸。

18.根據權利要求1或權利要求2所述的方法，其中所述丁二烯合成底物是丙酰基-CoA。