[發(fā)明專利]用于檢測單純皰疹病毒1和2的組合物

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380043113.3
• 申請日: 2013-08-15
• 公開（公告）號: CN104540967B
• 公開（公告）日: 2018-07-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: X.吳;K.揚(yáng)
• 申請（專利權(quán)）人: 霍夫曼－拉羅奇有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李慧惠;石克虎

描述了用于快速檢測生物或非生物樣品中單純皰疹病毒1和2(HSV?1和HSV?2)的存在或不存在的方法。所述方法可以包括進(jìn)行擴(kuò)增步驟、雜交步驟和檢測步驟。此外，提供了靶向HSV?1病毒DNA聚合酶B(HSV?1 Pol)和HSV?1胸苷激酶C(HSV?1 TK)的基因和還靶向HSV?2胸苷激酶C(HSV?2 TK)和HSV?2糖蛋白B(HSV?2 gB)的基因的引物、探針以及經(jīng)設(shè)計(jì)用于檢測HSV?1和/或HSV?2的試劑盒。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及病毒診斷的領(lǐng)域，并且更具體而言，涉及單純皰疹病毒1 和/或2的檢測。

發(fā)明背景

單純皰疹病毒1和2(HSV-1和HSV-2)，也稱為人皰疹病毒1和2型(HHV-1和-2)，是包膜雙鏈DNA病毒，且屬于皰疹病毒科(herpes virus family)皰疹病毒科(Herpesviridae)。通常，HSV病毒感染人的嘴(HSV-1)和生殖器(HSV-2)的皮膚或粘膜。HSV病毒能夠在初始感染后建立終身潛伏感染，且從潛伏再活化進(jìn)行新爆發(fā)。HSV感染通常涉及皮膚或粘膜上小水皰的長出，其后，病毒在提供感染區(qū)域的神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)仍然處于休眠狀態(tài)。病毒經(jīng)歷再活化的周期，其中病毒穿過神經(jīng)纖維回到皮膚，且由此引起與較早感染的相同的皮膚區(qū)域中的水皰長出。還存在不涉及水皰形成的情況。

HSV是多種病癥(包括失明和腦炎)的病原體。如果不進(jìn)行治療，則后者疾病的死亡率高達(dá)70％，相比之下，接受治療的那些中只有19％。約38％的經(jīng)治療患者完全恢復(fù)，這強(qiáng)調(diào)了早期診斷HSV感染的重要性。HSV-1主要引起成人腦炎，而HSV-2更常見地引起新生兒腦炎，后者與母體生殖器感染相關(guān)。此外，HSV-2是社會中最常見的性傳播疾病之一。HSV相關(guān)腦炎的致死率比所有其他類型的腦炎更高，為1至4/每百萬/每年。其癥狀的大多種類包括發(fā)燒、頭痛、癲癇、意識水平改變和性格改變。

傳統(tǒng)上，據(jù)信HSV-1引起口腔感染，而HSV-2引起生殖器感染。然而，在許多發(fā)達(dá)國家中，HSV-1是原發(fā)性生殖器皰疹的較常見原因，且經(jīng)常與HSV-2共感染。作為結(jié)果，擁有能夠同時(shí)檢測和鑒別兩種病毒的PCR測定變得非常重要。這個新的HSV測定經(jīng)設(shè)計(jì)以便在單一反應(yīng)管中完成該測定。

HSV-1和/或HSV-2(HSV-1/2)感染的診斷通常使用適當(dāng)臨床樣本上的細(xì)胞培養(yǎng)來進(jìn)行，這耗時(shí)又費(fèi)力。此外，HSV-1/2感染的血清學(xué)診斷缺乏足夠靈敏度和特異性。因此，本領(lǐng)域中需要快速和可靠的方法來以靈敏的方式特異性檢測兩種類型的HSV。

發(fā)明概述

本發(fā)明的實(shí)施方案涉及用于快速檢測生物或非生物樣品中HSV-1 和/或HSV-2核酸的存在或不存在的方法，例如，通過在單一試管中的實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)多重檢測HSV-1和/或HSV-2核酸。實(shí)施方案包括檢測HSV-1和/或HSV-2核酸的存在或不存在的方法，包括進(jìn)行至少一個循環(huán)步驟，其可包括擴(kuò)增步驟和雜交步驟。此外，實(shí)施方案包括設(shè)計(jì)用于檢測單一管中的單一HSV-1或HSV-2感染或HSV-1和HSV-2共感染的寡核苷酸引物、寡核苷酸探針和試劑盒。檢測方法被設(shè)計(jì)為靶向HSV-1病毒DNA聚合酶B (HSV-1 Pol)和HSV-1胸苷激酶C(HSV-1 TK)的基因，并且還同時(shí)靶向HSV-2胸苷激酶C (HSV-2 TK)和HSV-2糖蛋白B (HSV-2gB)的基因，這允許在單一測試中檢測和區(qū)分HSV-1和/或HSV-2感染。