[發明專利]基于胚泡發育的胚胎質量評估

有效

• 申請號: 201380040406.6
• 申請日: 2013-05-31
• 公開（公告）號: CN104508123B
• 公開（公告）日: 2017-08-22
• 發明（設計）人: 尼爾斯·B·拉姆辛;莫滕·克里斯滕森;梅特·萊格德斯曼德;雷敦·伯格霍爾德·庫爾曼;英吉·埃雷波·阿格霍姆;馬伊·法斯高·伊薩克森;延斯·K·岡德森
• 申請（專利權）人: 尤尼森斯繁殖技術公司
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073;G06K9/00
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司11262
• 代理人: 陳建芳,閻娬斌

技術領域

本發明涉及一種基于觀察到的細胞動力學和細胞形態學、尤其是在從致密化起始到胚泡形成的后期階段中的胚胎發育來選擇用于體外受精的胚胎的方法和系統。

背景技術

不孕癥影響全球超過8千萬人。據估計，所有夫婦中有10％經歷原發性或繼發性不孕癥。體外受精(IVF)是一種可選擇的醫學治療，其可以為原本不能懷孕的夫婦提供受孕的機會。它是將卵子(卵母細胞)從女性卵巢中取出然后在實驗室中用精子使其受精的過程。然后將這個過程中產生的胚胎放入子宮中以進行可能的著床。為了避免多胎妊娠和多胞胎，只移植幾個胚胎(通常少于4個并且理想地只有1個)。選擇用于移植的適當胚胎是任何IVF治療中的關鍵步驟。當前的選擇程序大部分完全基于使用標準立體顯微鏡對胚胎在發育期間的不同時間點的形態學評價，尤其是在移植時的評價。然而，人們普遍認識到，該評價程序需要定性以及定量方面的改進。

一種方法是使用“早期卵裂”至2細胞期(即在授精/注射后25-27小時之前)作為質量指標。在這種方法中，在受精后25-27小時對胚胎進行目視檢查以確定第一次細胞卵裂是否已經完成。然而，雖然早期卵裂以及其它早期標準可能是關于發育成胚胎的質量指標，但是仍然需要關于著床成功并且從而因此成功懷孕的質量指標。

在此申請中或在本申請中引用的所有專利和非專利參考文獻也以全文引用的方式并入本文中。

發明內容

最近的研究(Wong等人(2010))集中于胚胎基因組活化(EGA)之前的胚胎發育，指示了人類胚胎發育的成功和失敗主要是在EGA之前確定的，從而證明在受精后第2天的早期著床是正確的。本申請人在2012年5月31日提交的未決申請PCT/DK2012/05018(“Embryo quality assessment based on blastomere cleavage and morphology”)監測了其中發生胚胎基因組活化的后續卵裂的發生時間(timing)和持續時間，并且產生了另外的胚胎質量標準。然而，本發明人已經發現，監測胚胎一直到胚泡期(在此期間胚胎基因組活化已經完全占主導地位(take over))，可以產生一系列的胚泡質量標準，所述胚泡質量標準在選擇已轉化為胚泡的胚胎以增加著床成功性方面非常有用。傳統上已經基于滋養外胚層中或內細胞團中的細胞數目評價了胚泡，但是這些胚泡參數難以定量。因此，本發明的目的是研發更容易定量的新穎胚泡質量標準，以評價胚泡期的胚胎質量。

因此，本發明涉及一種有助于在胚胎轉化成胚泡后基于胚胎發育期間選取的形態學和/或動力學參數來選擇待移植用于著床的最佳體外受精胚胎的方法和系統。

在第一方面，本發明涉及一種用于確定胚胎質量的方法，其包括將所述胚胎監測一段時間，所述一段時間包括胚胎從受精或初始致密化轉化成胚泡，即胚泡期中的一個；和測定所述胚胎的一個或多個胚泡質量標準；以及基于所述一個或多個胚泡質量標準來確定胚胎質量。具體來說，可將本發明應用于人類胚胎，并且獲得的胚胎質量量度可用于鑒別和選擇適合移植到女性子宮中以便提供妊娠和活產嬰兒的胚胎。

胚泡質量標準可以有利地與例如在WO 2007/144001中和在2012年5月31日提交的名稱為“Embryo quality assessment based on blastomere cleavage and morphology”的未決PCT申請PCT/DK2012/05018中列出的早期胚胎質量參數組合，并且因此與胚胎質量和胚胎存活力的其它信息組合。這些申請因此也以全文引用的方式并入本文中。

定義和胚胎質量參數

卵裂時間被定義為觀察到新形成的卵裂球被融合的細胞膜完全分開的第一時間點。因此，卵裂時間是卵裂球卵裂完成的時間。在本上下文中，所述時間被表示為ICSI顯微注射后的小時數或在IVF中混合精液和卵母細胞后的小時數，即授精時間。這是將精子專門引入到卵子中的時間。然而，在本文中，還使用了術語受精來描述這個時間點。因此，卵裂時間如下：

·t2：卵裂成2卵裂球胚胎的時間

·t3：卵裂成3卵裂球胚胎的時間

·t4：卵裂成4卵裂球胚胎的時間

·t5：卵裂成5卵裂球胚胎的時間

·t6：卵裂成6卵裂球胚胎的時間

·t7：卵裂成7卵裂球胚胎的時間

·t8：卵裂成8卵裂球胚胎的時間

細胞周期的持續時間定義如下：

·cc1＝t2：第一個細胞周期。

·cc2＝t3-t2：第二個細胞周期，即作為2卵裂球胚胎的時間段的持續時間。