[發(fā)明專利]用于進(jìn)行結(jié)合測定的設(shè)備和方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380039736.3
• 申請日: 2013-03-13
• 公開（公告）號: CN104520690A
• 公開（公告）日: 2015-04-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李榮皓
• 申請（專利權(quán)）人: 珠海愷瑞生物科技有限公司(中國)
• 主分類號: G01N1/36
• 分類號: G01N1/36;G01N33/48
• 代理公司: 北京安信方達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11262
• 代理人: 孫靜;鄭霞

交叉引用

本申請要求提交于2012年5月25日的美國臨時申請第61/652,102號的權(quán)益，該申請通過引用并入于此。

背景技術(shù)

結(jié)合測定在生物和臨床應(yīng)用中得到廣泛使用，用于檢測和測量樣品中存在的分析物的量。結(jié)合測定一般要求使用與感興趣的分析物結(jié)合的結(jié)合配偶體和與該結(jié)合配偶體結(jié)合的檢測試劑。在直接結(jié)合測定中，結(jié)合配偶體偶聯(lián)至檢測試劑，而間接結(jié)合測定涉及添加與結(jié)合配偶體相互作用的單獨的檢測試劑。一種廣泛使用的結(jié)合測定形式為連接免疫吸附測定(LISA)，其中結(jié)合劑固定在固相上。通常，免疫吸附測定涉及通過將感興趣的分析物與結(jié)合劑相結(jié)合而將該分析物捕捉到固相上。對能夠與分析物結(jié)合的檢測試劑的添加繼而導(dǎo)致檢測試劑到固相上的后續(xù)捕捉。通常在指示出感興趣的分析物的存在或量的試劑的檢測之前，在一系列一個或多個洗滌步驟中移除未結(jié)合的檢測試劑。試劑的檢測可以利用酶促反應(yīng)(ELISA)或熒光檢測(FLISA)。

ELISA和FLISA通常在用于高通量篩選用途的多孔板(諸如96孔反應(yīng)板)中進(jìn)行。使用多孔板和裝置使得能夠進(jìn)行對多個樣品的并行處理，以供對一種或多種分析物的分析。例如，通常利用ELISA和FLISA來進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞系的抗體篩選。這些篩選測定一般涉及雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)基樣品在用感興趣的抗原包被的96孔板中的溫育。在溫育之后，必須在感興趣的抗體的檢測和陽性雜交瘤細(xì)胞系的鑒定之前進(jìn)行涉及與二級和/或三級檢測試劑的另外溫育和洗滌步驟的多步過程。然而，這些多步測定是費時的，這限制了檢測通量。減少這些檢測所需的步驟并從而減少所需時間量的裝置和方法將會大大提高檢測通量和效率。

發(fā)明內(nèi)容

因此，本發(fā)明提供將會允許具有更高通量和效率的更強健的結(jié)合測定的設(shè)備和方法。本文提供的是提供此類優(yōu)點和相關(guān)益處的組合物、方法、設(shè)備和試劑盒。在一方面，本發(fā)明提供了用于插入到多孔裝置的孔中的插入物。在一些實施方式中，所述插入物包含基本上不含微孔的內(nèi)表面和外表面；其中所述內(nèi)表面和/或外表面在其上固定有結(jié)合劑；其中所述插入物的尺寸設(shè)置為小于所述孔，使得所述插入物可以插入到所述孔中。

在另一實施方式中，所述插入物包含內(nèi)表面和外表面，其中所述內(nèi)表面和/或外表面在其上固定有結(jié)合劑，其中所述外表面具有的直徑小于所述孔的直徑，使得所述插入物可以插入到所述孔中；其中所述插入物向多孔裝置的孔中的插入使得所述孔與所述裝置的相鄰孔在光學(xué)上隔離。

在實施本發(fā)明的過程中，任何所述插入物可由不透明的材料制成，它們可以為圓柱形、中空的，或者可以包含多個空腔。

在相關(guān)方面，本發(fā)明提供了用于插入到多孔裝置的多個孔中的插入物陣列。在一些實施方式中，所述陣列被配置成使得每個單獨的插入物被安裝在連續(xù)的固體框架上，所述框架的尺寸設(shè)置為允許同時向所述多個孔的每個單獨的孔中插入和任選地移除每個單獨的插入物，其中所述單獨的插入物包含內(nèi)表面和外表面，該內(nèi)表面和外表面中的任一個或兩個在其上固定有結(jié)合劑，其中該內(nèi)表面和/或外表面基本上不含微孔。

在備選的實施方式中，所述陣列被配置成使得每個單獨的插入物被安裝在連續(xù)的固體框架上，所述框架的尺寸設(shè)置為允許同時向所述多個孔的每個單獨的孔中插入和任選地移除每個單獨的插入物，其中所述單獨的插入物包含內(nèi)表面和外表面，該內(nèi)表面和外表面中的任一個或兩個在其上固定有結(jié)合劑，其中所述單獨的插入物向所述單獨的孔中的插入使得所述孔與所述裝置上的其他相鄰孔在光學(xué)上隔離。

在實施本發(fā)明的過程中，任何所述陣列可被塑造成使得所述框架的尺寸設(shè)置為允許同時向所述多孔裝置的每個單獨的孔中插入和移除所述每個單獨的插入物。

在一些實施方式中，本發(fā)明的插入物或陣列的結(jié)合劑包括蛋白質(zhì)、抗體、單克隆抗體、抗原、配體、受體、親和素、生物素、鏈霉親和素或半抗原。

在相關(guān)實施方式中，本發(fā)明提供了具有多個孔的多孔裝置，所述多個孔中的至少一個包含本文所述的插入物，或者所述多個孔包含本文所述的插入物陣列。在進(jìn)一步的實施方式中，所述多孔裝置具有6、12、24、48、96、384、1536或3456個孔。