[發明專利]用于使基因表達沉默的組合物和方法

有效

• 申請號: 201380039346.6
• 申請日: 2013-05-23
• 公開（公告）號: CN104619843B
• 公開（公告）日: 2020-03-06
• 發明（設計）人: A.阿夫尼伊;E.里多爾-尼里;R.茂爾;O.梅爾;O.奈維特-布里克;O.亞奈-阿祖拉
• 申請（專利權）人: A.B.種子有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 初明明;萬雪松

1.一種將外源裸dsRNA引入種子的方法，所述方法包括：

a. 用水洗滌所述種子2-6小時；

b. 在20-30℃的溫度下干燥種子至多24小時；和

c. 使種子與包含1 μg/mL-261 μg/mL的裸dsRNA和0.1 mM EDTA的水溶液直接接觸，其中裸dsRNA靶向內源植物基因或植物病毒病原體基因用于抑制，由此裸dsRNA滲透種子，從而將裸dsRNA引入種子中。

2.一種產生植物的方法，所述方法包括：

(a)按照權利要求1的方法將外源裸dsRNA引入種子中；和

(b)使種子萌發以產生植物。

3.一種調節自種子生長的植物中的基因表達的方法，所述方法包括：

(a) 用水洗滌所述種子2-6小時；

(b) 在20-30℃的溫度下干燥種子至多24小時；

(c) 使種子與包含1 μg/mL-261 μg/mL的裸dsRNA和0.1 mM EDTA的水溶液直接接觸，由此裸dsRNA滲透種子，從而將dsRNA引入種子中；和

(d) 自種子產生植物，其中裸dsRNA靶向內源植物基因或病毒植物病原體基因用于抑制。

4.權利要求1-3中任一項的方法，其中所述內源植物基因與對非生物脅迫或生物威迫的耐受性有關。

5.權利要求1-3中任一項的方法，其中所述接觸通過在水溶液中浸泡種子進行，并且其中所述方法還包括在所述浸泡后將所述種子干燥。

6.權利要求4的方法，所述方法還包括在所述產生后使所述植物在非生物脅迫或生物脅迫下生長。

7.權利要求1或3的方法，其中設計所述裸dsRNA用于減量調節植物基因的表達。

8.權利要求7的方法，其中所述植物基因是內源基因。

9.權利要求1或3的方法，其中設計所述裸dsRNA用于減量調節病毒病原體基因的表達。

10.權利要求1-3中任一項的方法，其中所述滲透是進入所述種子的胚乳中并且備選地或另外地進入所述種子的胚中。

11.權利要求1-3中任一項的方法，其中所述裸dsRNA不整合至所述種子的基因組中。

12.權利要求1-3中任一項的方法，其中在萌發后所述裸dsRNA在植物中存在至少10天。

13.一種抑制植物病毒中目標基因的表達的方法，所述方法包括使植物病毒與通過權利要求2或3的方法產生的植物或植物部分接觸，從而抑制植物病毒中目標基因的表達。

14.權利要求13的方法，所述方法還包括觀察在所述提供后所述病毒病原體可感染性或可復制性的降低。

15.權利要求1-3中任一項的方法，其中所述dsRNA包含siRNA。

16.權利要求1-3中任一項的方法，其中所述接觸通過將種子浸泡在所述水溶液中來實行。

17.權利要求1-3中任一項的方法，其中所述洗滌在4-28℃下實行。

18.權利要求1-3中任一項的方法，其中所述干燥在25-30℃下實行10-16小時。

19.權利要求1-3中任一項的方法，所述方法還包括在所述接觸后用選自殺蟲劑、殺真菌劑、肥料、涂布劑和著色劑的作用劑處理種子。