[發明專利]利用混合的多官能性表面降低蛋白制劑中聚集物含量的方法

有效

• 申請號: 201380039329.2
• 申請日: 2013-02-06
• 公開（公告）號: CN104487446B
• 公開（公告）日: 2018-05-29
• 發明（設計）人: 彼得·加尼翁
• 申請（專利權）人: 新加坡科技研究局
• 主分類號: C07K1/16
• 分類號: C07K1/16;C07K1/18;C07K16/00
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

降低抗體和其他蛋白制劑的聚集物水平的方法，包括如下步驟：用有機多價陽離子(例如，依沙吖啶、氯己定或聚乙烯亞胺)處理，以及用包含具有負電性化學部分的表面和具有正電性化學部分的表面的組合的組合物處理。

技術領域

本發明涉及用于純化蛋白尤其是抗體的材料。其具體涉及用于降低蛋白聚集物含量的材料。其還涉及將這些能力與其他純化方法整合以實現蛋白的期望水平的最終純化。

發明背景

已證明宿主細胞來源的污染物與通過體外細胞培養方法產生的重組蛋白間自發形成非天然的異源聚集物(Shukla et al.,Biotechnol.Progr.(2008)24:1115-1121；Luhrs et al.,J.Chromatogr.B(2009)877:1543-1552；Mechetner et al.,J.Chromatogr.B(2011)879:2583-2594；Gagnon et al.,J.Chromatogr.A,(2011)1218:2405-2412；Gagnon,Bioprocessing J.(2010)9(4):14-24)。這些異源聚集物在兩個方面可被認為是非天然的：1)組成性污染物常常為非人來源的，由活的非人宿主細胞分泌，或在非人的宿主細胞死亡裂解后釋放至培養基中。在活的人體中，不存在此類非人的污染物；以及2)相比人體內系統(其中死細胞組分被快速清除)，組成性污染物積累至較高濃度。因此，組成性產物以在生命系統中通常不會出現的濃度暴露于高水平的強相互作用的污染物。同時，高表達水平的重組蛋白使得其成為適于與這些非人的污染物非特異性結合的底物，從而促進不同組分的非期望異源聚集物的形成。

異源聚集物的污染蛋白含量在某種程度上通過直接靶向污染蛋白(Shukla etal.和Gagnon et al.,同上)和間接通過靶向針對污染蛋白的對應的DNA組分(Luhrs etal.和Gagnon,同上)進行處理。已證明在一些復合物解離時出現了抗體聚集物水平的降低(Shukla et al.,Mechetner et al.和Gagnon,同上)。已公開了陰離子交換劑降低抗體-污染物復合物水平的能力(Luhrs et al.和Gagnon et al.,同上)，但還未證明存在能夠完全清除異源聚集物的陰離子交換處理。尺寸排阻、陽離子交換和疏水相互作用層析法也被用于嘗試降低異源聚集物，但這些技術通常不如陰離子交換(Gagnon et al.,同上)。

與抗體形成穩定結合物的污染物的具體來源并非總是已知的(參見，例如Shuklaet al.同上)。一些努力聚焦于DNA污染物，而很少注意到其他可能的污染物的具體來源(Gagnon et al.和Gagnon,同上)。一些證明宿主污染物與抗體制備中的聚集物關聯性的努力特別地聚焦于包含核染色質降解產物的污染物(Luhrs et al.和Mechetner et al.同上)。在這些實例中，聚合可直接通過抗體對核染色質代謝產物如組蛋白和DNA的免疫特異性介導。還證明核染色質代謝產物能夠通過非特異性相互作用與抗體形成穩定復合物。因此，對不包含核染色質代謝產物的抗原具有已知免疫特異性的單克隆抗體，可與來源于死的宿主細胞的細胞核的核小體、組蛋白和DNA形成具有不同類型的高度穩定的聚集物。特別地，已證明核染色質代謝產物在高分子量(HMW)聚集物中有高度代表性。HMW聚集物特別值得關注，因為其疑似參與促進治療中和性抗體的形成。HMW聚集物通常被定義為大小比目標抗體的較小倍數更大的聚合物。例如，2-抗體結合物不被認為是HMW聚集物，大多數4-抗體聚集物也不是。然而，大小大得多的聚集物如對應于約8至約10或更多的抗體的聚集物通常可被歸類為HMW聚集物。