[發明專利]制備重組人酪氨酸酶的方法有效
| 申請號： | 201380039269.4 | 申請日： | 2013-07-10 |
| 公開（公告）號： | CN104662149B | 公開（公告）日： | 2018-11-20 |
| 發明（設計）人： | G.錢德拉莫里;S.馬哈帕特拉;S.蒂馬斯亞;D.H.丹德卡;S.克里斯蘭 | 申請（專利權）人： | 荷蘭聯合利華有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/00 | 分類號： | C12N9/00;A61K8/66;A61Q5/10;C12N9/02 |
| 代理公司： | 永新專利商標代理有限公司 72002 | 代理人： | 林曉紅;柴麗敏 |
| 地址： | 荷蘭*** | 國省代碼： | 荷蘭;NL |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 制備 重組 酪氨酸 方法 | ||
【權利要求書】：
1.制備重組人酪氨酸酶的方法，其包括步驟
(i)使用PCR以密碼子優化的方式合成制備人酪氨酸酶基因；
(ii)克隆所述基因至桿狀病毒表達載體中；
(iii)從獲得自步驟(ii)的克隆制備桿粒；
(iv)用所述桿粒感染昆蟲細胞以制備病毒滴度；和
(v)對期望的人酪氨酸酶的表達篩選優化MOI(感染復數)和時間點，
其中步驟(v)中使用包含銅鹽的細胞培養基，且其中以每升所述細胞培養基0.1至25微摩爾范圍內的濃度包含所述銅鹽，
其中所述人酪氨酸酶基因是跨膜區缺失的或是全長的，
其中所述跨膜區缺失的人酪氨酸酶基因的序列示于SEQ ID NO:4；
其中所述全長的人酪氨酸酶基因的序列示于SEQ ID NO:5；
其中所述載體是pFastbacTM；且
其中所述昆蟲細胞是Sf9或HighFiveTM細胞。
2.權利要求1的方法，其中所述銅鹽是氯化銅或硫酸銅。
3.權利要求1或2的方法，其中以每升所述細胞培養基5微摩爾的濃度包含所述銅鹽。
4.權利要求1的方法，其中所述方法包括裂解所述昆蟲細胞以制備所述人酪氨酸酶的步驟。
5.權利要求1的方法，其包括從昆蟲細胞生長培養基上清液中收集所述人酪氨酸酶的步驟。
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