[發(fā)明專利]用于降低蛋白制劑領(lǐng)域中的聚集物含量的混合的多官能性金屬親和表面

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380038904.7
• 申請日: 2013-02-06
• 公開（公告）號: CN104487447B
• 公開（公告）日: 2018-10-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 彼得·加尼翁
• 申請（專利權(quán)）人: 新加坡科技研究局
• 主分類號: C07K1/18
• 分類號: C07K1/18;C07C233/47;C07C55/22;C07C55/02;C07C211/14;C07C259/06;B01D15/36;B01D15/38;B01D39/00
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11204
• 代理人: 王達(dá)佐;洪欣

用于降低蛋白制劑的聚集物含量的組合物，包括含有第一表面結(jié)合配體的第一基底，所述第一表面結(jié)合配體具有金屬親和官能性，所述第一基底還包括第二表面結(jié)合配體或第二表面結(jié)合配體任選地提供于第二基底上，所述第二表面結(jié)合配體具有與所述第一基底的金屬親和官能性電荷相反的聚集物電荷，其中所述第一表面結(jié)合配體和所述第二表面結(jié)合配體的位置使得所述蛋白制劑可同時(shí)接觸所述第一表面結(jié)合配體和所述第二表面結(jié)合配體。

本發(fā)明涉及用于純化蛋白，特別是抗體的材料。其具體涉及用于降低聚集物，且特別是包含宿主細(xì)胞染色質(zhì)殘留物如核小體、組蛋白和DNA的聚集物的含量的材料。

發(fā)明背景

已證明宿主細(xì)胞來源的污染物與通過體外細(xì)胞培養(yǎng)方法產(chǎn)生的重組蛋白間自發(fā)形成非天然的異源聚集物(Shukla et al.,Biotechnol.Progr.(2008)24:1115-1121；Luhrs et al.,J.Chromatogr.B(2009)877:1543-1552；Mechetner et al.,J.Chromatogr.B(2011)879:2583-2594；Gagnon et al.,J.Chromatogr.A,(2011)1218:2405-2412；Gagnon,Bioprocessing J.(2010)9(4):14-24)。這些異源聚集物在兩個(gè)方面可被認(rèn)為是非天然的：1)組成性污染物常常為非人來源的，由活的非人宿主細(xì)胞分泌，或在非人的宿主細(xì)胞死亡裂解后釋放至培養(yǎng)基中。在活的人體中，不存在此類非人的污染物；以及2)相比人體內(nèi)系統(tǒng)(其中死細(xì)胞組分被快速清除)，組成性污染物積累至較高濃度。因此，組成性產(chǎn)物以在生命系統(tǒng)中通常不會(huì)出現(xiàn)的濃度暴露于高水平的強(qiáng)相互作用的污染物。同時(shí)，高表達(dá)水平的重組蛋白使得其成為適于與這些非人的污染物非特異性結(jié)合的底物，從而促進(jìn)不同組分的非期望異源聚集物的形成。

異源聚集物的污染蛋白含量在某種程度上通過直接靶向污染蛋白(Shukla etal.和Gagnon et al.,同上)和間接通過靶向針對污染蛋白的對應(yīng)的DNA組分(Luhrs etal.和Gagnon,同上)進(jìn)行處理。已證明在一些復(fù)合物解離時(shí)出現(xiàn)了抗體聚集物水平的降低(Shukla et al.,Mechetner et al.和Gagnon,同上)。已公開了陰離子交換劑降低抗體-污染物復(fù)合物水平的能力(Luhrs et al.和Gagnon et al.,同上)，但還未證明存在能夠完全清除異源聚集物的陰離子交換處理。尺寸排阻、陽離子交換和疏水相互作用層析法也被用于嘗試降低異源聚集物，但這些技術(shù)通常不如陰離子交換(Gagnon et al.,同上)。

與抗體形成穩(wěn)定結(jié)合物的污染物的具體來源并非總是已知的(參見，例如Shuklaet al.同上)。一些努力聚焦于DNA污染物，而很少注意到其他可能的污染物的具體來源(Gagnon et al.和Gagnon,同上)。一些證明宿主污染物與抗體制備中的聚集物關(guān)聯(lián)性的努力特別地聚焦于包含核染色質(zhì)降解產(chǎn)物的污染物(Luhrs et al.和Mechetner et al.同上)。在這些實(shí)例中，聚合可直接通過抗體對核染色質(zhì)代謝產(chǎn)物如組蛋白和DNA的免疫特異性介導(dǎo)。還證明核染色質(zhì)代謝產(chǎn)物能夠通過非特異性相互作用與抗體形成穩(wěn)定復(fù)合物。因此，對不包含核染色質(zhì)代謝產(chǎn)物的抗原具有已知免疫特異性的單克隆抗體，可與來源于死的宿主細(xì)胞的細(xì)胞核的核小體、組蛋白和DNA形成具有不同類型的高度穩(wěn)定的聚集物。特別地，已證明核染色質(zhì)代謝產(chǎn)物在高分子量(HMW)聚集物中有高度代表性。HMW聚集物特別值得關(guān)注，因?yàn)槠湟伤茀⑴c促進(jìn)治療中和性抗體的形成。HMW聚集物通常被定義為大小比目標(biāo)抗體的較小倍數(shù)更大的聚集物。例如，2-抗體結(jié)合物不被認(rèn)為是HMW聚集物，大多數(shù)4-抗體聚集物也不是。然而，大小大得多的聚集物如對應(yīng)于約8至約10或更多的抗體的聚集物通?？杀粴w類為HMW聚集物。