[發明專利]包含固醇修飾的脂質和純化的分枝桿菌脂質細胞壁組分的脂質體組合物及其在肺結核診斷中的用途

有效

• 申請號: 201380038663.6
• 申請日: 2013-06-07
• 公開（公告）號: CN104685358B
• 公開（公告）日: 2017-09-22
• 發明（設計）人: 卡爾·鮑邁斯特;沃爾特·艾倫·肖;賈恩·阿德里亞努斯·弗朔爾
• 申請（專利權）人: 比勒陀利亞大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;A61K8/63
• 代理公司: 北京德琦知識產權代理有限公司11018
• 代理人: 康泉,王珍仙

技術領域

本發明涉及含有固醇修飾的脂質和純化的分枝桿菌脂質細胞壁組分的脂質體組合物，其在活動性肺結核的診斷中被用作用于檢測抗原特異性生物標志物抗體的抗原呈遞的載體。

背景技術

迄今為止，還沒有用于診斷肺外TB、小兒TB和HIV共感染TB的可靠的商業檢測方法。也沒有用于診斷TB的可靠的基于血液的方法。目前，所有的商業方法都是基于血清樣品。精確檢測低親合性患者的抗-分枝菌酸(MA)抗體(作為活動性肺結核的生物標志物)的能力會完全改變現狀。這樣的方法是存在的，并且被稱為分枝菌酸抗體實時抑制測試(MARTI-測試)(Verschoor et al.,2005,Thanyani et al.,2008,Lemmer et al.,2009)。MARTI-測試能夠區分兩種低親合性抗體系統：無所不在的抗-膽固醇抗體和TB患者特異性抗-MA抗體，其是交叉反應性的。這通過使用表面等離子體共振(Lemmer et al.,2009)、或電阻抗生物傳感器技術(Mathebula et al.,2009)來實現。本發明本身涉及改善脂質抗原固定化技術以使得其在能夠支持MARTI-測試的任何技術平臺上更適合用于實際診斷應用。

TB診斷學

肺結核(TB)是一種由通常感染肺的結核分枝桿菌造成的細菌性疾病。現今，世界人口的大約三分之一被感染并且每年出現接近兩百萬例死亡。其是免疫低下個體(例如HIV患者)的主要死因(Vassall et al.,2011)。肺結核是一種復雜的疾病，其能夠誘發體液和細胞免疫應答。目前，對于活動性肺TB診斷的黃金標準仍然是臨床檢查與來自血清的分枝桿菌培養檢查聯用(Andersen et al.,2000)。這種方法會耗費至少六周的時間(Van Deun et al.,2010)，在該期間內患者可能已經感染了朋友和家人、同事、公共交通工具上的乘客和醫務人員。對于耐酸細菌(AFB)的涂片顯微鏡檢查更快且成本更低，但其靈敏度較低，通常僅在晚期成年肺TB患者中顯示達到陽性，此時，該患者已經經受了不可逆的肺部損傷。

HIV共感染和TB診斷

GeneXpert和其他核酸擴增測試(NAATs)對于免疫低下患者(例如那些患有HIV共感染的患者)的診斷不夠靈敏。當患有HIV共感染時，細菌經常會從肺部逃逸，這導致血清中含有不足以被涂片顯微鏡、分枝桿菌培養物或甚至是抗原特異性NAATs檢測的細菌數目(Wilson,2005)。

據WHO報告，2009年在南非有超過72％的TB患者為HIV共感染。南非是世界上TB和AIDS患病率最高的國家(Floyd et al.,2011)，從而極大地降低了GeneXpert分析的效果。另一種并發癥是AIDS和TB之間的拮抗關系，其在至少90％的未經治療患者中發生并導致在數月內死亡(WHO 2011,Gandhi et al.,2006)。

肺外TB的診斷

肺外TB的發生是由于淋巴結、胸膜或腦膜組織、中樞神經系統、骨骼和/或關節、泌尿生殖器官、腹腔、皮膚或其他散播性部位的感染(Steingart et al.,2011)。肺外TB的診斷遭遇了許多挑戰，其尚未由具體的診斷方法獲得解決。這就迫使臨床醫師僅憑經驗對高風險患者開出長期治療的處方(Rao,2007)，使得這些患者承擔可由精確診斷避免的治療副作用。由此，很好地解釋了對于功能性血清學肺外TB診斷的需求。

小兒TB的診斷

在兒童中的肺結核診斷比在成年患者中更復雜。這是由于在血清樣品中通常獲得低細菌負載量。最近于2011年對于GeneXpert系統用于檢測小兒TB的能力進行了研究。結果表明，對于年齡為15歲及以下的涂片呈陰性的兒童，具有98.8％的特異性，而靈敏度則低至27.8％(Nicol et al.,2011)。這暗示了盡管現代診斷學有所發展，但小兒TB仍然難以診斷。

免疫分析

抗體免疫分析的基本原理是檢測抗體與抗原的結合。免疫分析使用了這樣的事實，即在對外來生物如細菌和病毒的響應中，免疫系統會產生高度特異于幾乎無限量的抗原的抗體。產生這些抗體的目的在于標記將要被破壞的靶細胞。如果能夠獲得純化的抗原，就能夠在免疫分析中檢測特異于該抗原的抗體。