[發明專利]降解角蛋白的方法以及制備的角蛋白水解產物的用途

在審

• 申請號: 201380038646.2
• 申請日: 2013-07-19
• 公開（公告）號: CN104470370A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: S.于;C.H.波爾森;J.G.漢斯特德;M.B.佩德森
• 申請（專利權）人: 杜邦營養生物科學有限公司
• 主分類號: A23K1/10
• 分類號: A23K1/10;C12P21/06
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李波;李炳愛

1.一種商業制備角蛋白水解產物的方法，包括以下步驟：

i)將至少5g角蛋白材料與蛋白酶和還原劑在受控的氧氣水平下混合。

2.一種降解角蛋白的方法，包括將至少1kg角蛋白材料與蛋白酶和還原劑在受控的氧氣水平下混合。

3.根據權利要求1或權利要求2所述的方法，其中所述反應在封閉系統中進行。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其中所述氧氣水平通過以下方式中的一種或多種來控制：加熱、蒸汽沖洗、添加氮氣和施加真空。

5.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述還原劑為亞硫酸鹽(例如Na₂SO₃和NaHSO₃)、亞硫酸氫鹽、連二亞硫酸鹽、偏亞硫酸氫鹽、硫化物、二氧化硫、DTT和β-巰基乙醇。

6.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中還將表面活性劑用于工藝步驟i)。

7.根據權利要求6所述的方法，其中所述表面活性劑選自以下中的一者或多者：癸酸鈉；Triton-X-100；吐溫20；吐溫80；卵磷脂；聚氧乙烯硬脂酸酯；聚氧乙烯山梨醇酐單月桂酸酯；聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯；聚氧乙烯山梨醇酐單棕櫚酸酯；聚氧乙烯山梨醇酐單硬脂酸酯；聚氧乙烯山梨醇酐三硬脂酸酯；磷脂酸銨；脂肪酸的鈉鹽、鉀鹽或鈣鹽；脂肪酸的鎂鹽；脂肪酸的單和二甘油酯的乙酸酯；脂肪酸的單和二甘油酯的乳酸酯；脂肪酸的單和二甘油酯的檸檬酸酯；脂肪酸的單和二甘油酯的單和二乙酰基酒石酸酯；脂肪酸的蔗糖酯；蔗糖甘油酯；脂肪酸的聚甘油酯；聚甘油聚蓖麻酸酯；脂肪酸的丙烷-1，2-二醇酯；與脂肪酸的單和二甘油酯相互作用的熱氧化大豆油；硬脂酰-2-乳酸鈉；硬脂酰-2-乳酸鈣；山梨醇酐單硬脂酸酯；山梨醇酐三硬脂酸酯；山梨醇酐單月桂酸酯；山梨醇酐單油酸酯和山梨醇酐單棕櫚酸酯。

8.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述角蛋白材料包括以下中的一者或多者：羽毛、毛發、毛皮、獸蹄、指/趾甲和羊毛。

9.根據權利要求8所述的方法，其中所述角蛋白材料包括羽毛。

10.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述蛋白酶得自選自以下的屬中的一者或多者：芽孢桿菌屬(Bacillus)、曲霉屬(Aspergillus)、鏈霉菌屬(Streptomyces)、木霉屬(Trichoderma)、沙雷氏菌屬(Serratia)以及擬諾卡氏菌屬(Nocardiopsis)。

11.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述蛋白酶得自芽孢桿菌屬(Bacillus)。

12.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述蛋白酶包含如SEQ?ID?NO：1或2中任一者所定義的多肽序列，或其功能性片段或變體，所述功能性片段或變體在至少50個氨基酸殘基上與SEQ?ID?NO：1或2中的任一者具有至少75％的序列同一性。

13.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述蛋白酶可由與SEQ?ID?NO3或SEQ?ID?NO4具有至少75％同一性的編碼蛋白酶的核酸序列、或在嚴格條件下能夠雜交至SEQ?ID?NO3或SEQ?ID?NO4的核酸序列或其互補序列的核酸序列轉錄。

14.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述方法包括化學水解步驟，其中所述化學水解在反應步驟i)之前、期間或之后進行。

15.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中在步驟1)之前將所述角蛋白材料切成較小的碎片。

16.一種制備動物飼料的方法，包括將通過根據權利要求1至13中任一項所述的方法制備的角蛋白水解產物與一種或多種動物飼料組成組分混合。

17.蛋白酶與還原劑相結合在制備角蛋白水解產物中的用途，其中所述蛋白酶包含如SEQ?ID?NO：1或2中任一者所定義的多肽序列，或其功能性片段或變體，所述功能性片段或變體在至少50個氨基酸殘基上與SEQ?ID?NO：1或2中的任一者具有至少75％的序列同一性。