[發明專利]生物靶標與固相酰脲的選擇性結合

有效

• 申請號: 201380038205.2
• 申請日: 2013-05-30
• 公開（公告）號: CN104619388A
• 公開（公告）日: 2015-05-13
• 發明（設計）人: 彼得·加尼翁
• 申請（專利權）人: 新加坡科技研究局
• 主分類號: B01D15/00
• 分類號: B01D15/00;C12N7/02;G01N33/48
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

相關申請的聲明

本申請要求2012年5月31日提交的美國臨時申請號61/653,729和也在2012年5月31日提交的美國臨時申請號61/653,740的優先權，其內容通過引用整體并入本文。

領域

本文中公開的實施方案涉及使用帶有酰脲的固體表面選擇性地結合獨立地存在或存在于組裝物中的生物靶標的方法。這樣的生物靶標的尺寸可以廣泛地變化，且在特定實施方案中，它們的尺寸可以包括約20微米或更多至數百萬道爾頓。這樣的生物靶標具體地包括細胞、細胞的亞結構、病毒和/或聚集體，其中所述方法的目的是從局部環境取出它們，可能純化它們用于隨后的應用。本文中公開的方法還可以與其它分級分離步驟組合，以實現大生物靶標的更高純化程度，或進一步純化已經從其中除去大生物靶標的樣品的不同期望組分。

背景

基于涉及的功能機制，可以將沉淀方法分類成2類：沉淀和共沉淀。經典的沉淀方法經常采用大量添加劑，所述添加劑以使得要沉淀的物質不溶的方式改變溶劑的特性。所述添加劑本身可以保持可溶性，且當將上清液與沉淀物分離時會除去大部分添加劑。然后將沉淀物再懸浮于流體中，所述流體缺乏用于介導沉淀的試劑。痕量的試劑可以容易地除去，因為它們不會與要沉淀的產物形成永久結合。例子包括使用以下試劑的沉淀：鹽諸如硫酸銨、檸檬酸鈉和磷酸鉀等；有機聚合物諸如聚乙二醇、聚丙二醇、葡聚糖和聚乙烯吡咯烷酮等；和有機溶劑諸如丙酮、氯仿和醇等。

共沉淀方法通常如下工作：結合要沉淀的物質，并將它的溶解度降低至其自發地形成沉淀的點。可以使用該技術選擇性地沉淀具有研究或商業利益的蛋白或病毒。同樣，可以使用該技術從含有目標蛋白或DNA質粒的制品中選擇性地沉淀一種或多種污染物物質。從蛋白和DNA質粒制品除去的重要污染物具體地包括病毒和內毒素。與經典沉淀相比，共沉淀通常有利之處是，它經常使用較低量的沉淀劑，但是不利之處是，沉淀的產物的回收不僅采用其在沒有沉淀劑存在下的再懸浮，而且可能造成對額外處理步驟的需求，所述額外處理步驟轉移保持以痕量與目標產物結合的殘余沉淀劑。這經常通過引入破壞產物和共沉淀劑之間的相互作用的試劑來完成。共沉淀劑的例子包括陰離子聚合物、陽離子聚合物和脂肪酸等。用于轉移殘余沉淀劑的物質包括高濃度的中性鹽諸如氯化鈉、離液劑和有機溶劑等。

經典沉淀方法和共沉淀方法都已經用在病毒的純化中。許多類型的化學表面具有結合病毒的能力。一些包括經過化學修飾以通過正電荷或負電荷或疏水性(諸如離子交換劑和疏水相互作用色譜介質)介導與病毒的相互作用的表面。這些材料具有合乎需要的結合不同病毒種類和相當低的成本的特性，但是也具有不希望的結合大量蛋白和需要廣泛過程開發的特性。可替換地，與其它蛋白相比，抗體作為生物親和配體在表面上的固定化可以對病毒是特異性的，且僅需要有限的過程開發，但是具有固定化的抗體的表面通常僅結合單一病毒種類，且它們相對是非常昂貴的。

酰脲已經表現出作為在人皮膚養護產品中廣泛使用的非炎性試劑或抗炎劑的活性。一個常見的例子是尿囊素，其難溶于水溶液，且在約36mM的濃度時飽和。超過該濃度的量作為晶體存在。已經將一些酰脲共價地固定化在二氧化硅顆粒上。已經證實了1-[3-(三甲氧基甲硅烷基)丙基]脲在二氧化硅上的固定化(Bicker等人.J.Chromatogr.A,1218?882-895?2011)，并且該構建體用于多種小分子化合物的親水相互作用色譜。已經在二氧化硅上固定化了摻入脲片段的雙齒烷氧基硅烷(Kotoni等人J.Chromatogr.A,1232?196-211?2012)，其也用于親水相互作用色譜，并且被發現可用于糖的分析。已經描述了與多價陽離子組合的尿囊素用于從含有抗體的細胞培養物上清液澄清聚集體的用途(J.Chromatogr.A,129133-40?2013)。

發明內容