[發(fā)明專利]亞家族E猿腺病毒A1302、A1320、A1331和A1337及其用途

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201380037457.3
• 申請日: 2013-05-17
• 公開（公告）號: CN105473723A
• 公開（公告）日: 2016-04-06
• 發(fā)明（設計）人: S·羅伊;J·M·威爾森
• 申請（專利權）人: 賓夕法尼亞大學托管會
• 主分類號: C12N15/86
• 分類號: C12N15/86
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 余穎

電子形式提交材料的納入?yún)⒖?/p>

本文中以電子形式提交的序列表通過引用納入本文。該文件的文件名為“UPN_Y6334PCT_ST25.txt”，創(chuàng)建于2013年5月17日，且是3,085,687字節(jié)(2.94MB)。

發(fā)明背景

腺病毒是雙鏈DNA病毒，基因組大小約為36千堿基(kb)，由于能夠在多種靶組織中實現(xiàn)高效基因轉移以及較大的轉基因容量，它被廣泛用于基因轉移應用。通常，腺病毒的E1基因缺失并被取代為由所選啟動子、感興趣基因cDNA序列和聚A信號組成的轉基因盒，產(chǎn)生復制缺陷型重組病毒。

腺病毒的形態(tài)特征是由三種主要蛋白和許多群體小蛋白VI、VIII、IX、IIIa和IVa2組成的二十面體衣殼，這三種主要蛋白是六鄰體(II)、五鄰體基質(III)和突結纖毛(knobbedfibre)(IV)[W.C.Russell，J.GenVirol.，81:2573-3704(2000年11月)]。病毒基因組為線性雙鏈DNA，末端蛋白共價連接于含有末端反向重復(ITR)的5’末端。病毒DNA與高堿性蛋白VII和小肽pX(先前稱為mu)的密切相連。另一種蛋白V與此DNA-蛋白質復合物包裝在一起，并通過蛋白VI提供與衣殼的結構連接。該病毒也含有病毒編碼的蛋白酶，這種蛋白酶是加工某些結構蛋白以產(chǎn)生成熟的感染性病毒所必需的。

已發(fā)展出針對哺乳動物腺病毒家族的分類方案，所述哺乳動物腺病毒家族包括人、猿、牛、馬、豬、綿羊、犬和負鼠腺病毒。該分類方案是基于家族中腺病毒序列凝集血紅細胞能力的差異來發(fā)展的。結果是6個亞組，目前稱為亞組A、B、C、D、E和F。參見T.Shenk等，Adenoviridae:TheVirusesandtheirReplication(腺病毒科：病毒及其復制)，第67章，F(xiàn)IELD'SVIROLOGY(《費氏病毒學》)，第6版，B.NFields等編(林普科特瑞文出版社(LippincottRavenPublishers)，費城，1996)，第111-2112頁。

已報道可使用重組腺病毒將異源分子遞送至宿主細胞。參見美國專利6,083,716，其描述了兩種黑猩猩腺病毒的基因組。猿腺病毒C5、C6和C7描述于美國專利號7,247,472中，可用作疫苗載體。其他黑猩猩腺病毒描述于WO2005/1071093，可用于制備腺病毒疫苗運載體。

本領域中需要的載體應能將分子有效遞送至靶標并最小化預存免疫對群體中所選腺病毒血清型的影響。

發(fā)明內容

本發(fā)明提供了6種全新的亞家族E猿腺病毒的分離的核酸序列和氨基酸序列，和包含這些序列的載體。還提供了使用本發(fā)明的載體和細胞的多種方法。這些腺病毒包括SAdV-A1302、SAdV-A1320、SAdV-A1331和SAdV-A1337。

本文所述方法涉及通過給予本發(fā)明的載體遞送一種或多種所選異源基因至哺乳動物患者。還提供了用于遞送分子至靶細胞的本文所述腺病毒或重組腺病毒。還提供了本文所述腺病毒重組腺病毒在制備用于遞送分子至靶細胞的藥物過程中的用途。將本文所述組合物用于疫苗使得所選抗原得以遞呈，用于誘發(fā)保護性免疫應答?；谶@些猿腺病毒的載體還可用于在體外生產(chǎn)異源基因產(chǎn)物。這類基因產(chǎn)物本身可用于多種目的，如本文所述的那些。

下文中更詳細描述了本發(fā)明的這些和其他實施方式和優(yōu)勢。

附圖簡要說明

圖1是柱狀圖，反映了注射所示腺病毒載體后第8天和第14天T細胞對HIVgag(短)的應答，所述腺病毒載體攜帶相同轉基因。使用免疫顯性HIVgag短CD8T細胞表位AMQMLKETI(SEQIDNO:410)，通過IFN-γELISPOT分析T細胞應答。

發(fā)明詳述

提供了來自猿腺病毒SAdV-A1302、SAdV-A1320、SAdV-A1331和SAdV-A1337的全新核酸和氨基酸序列，所有這些序列都分離自黑猩猩糞便。

還提供了全新的腺病毒載體和包裝細胞系以生產(chǎn)基于這些序列的載體用于重組蛋白或片段或其他試劑的體外生產(chǎn)。還提供了用于為治療或疫苗目的遞送異源分子的組合物。這類治療或疫苗組合物含有攜帶插入的異源分子的腺病毒載體。此外，全新的SAdV序列可用于提供生產(chǎn)重組腺相關病毒(AAV)載體所需的必需輔助功能。因此，提供了這類生產(chǎn)方法中使用這些序列的輔助構建體、方法和細胞系。