[發(fā)明專利]制造含有叔氨基的脂質(zhì)的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201380035717.3
• 申請(qǐng)日: 2013-06-21
• 公開（公告）號(hào): CN104428280A
• 公開（公告）日: 2015-03-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 久保和弘;丹下耕太;太田雅己
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 日油株式會(huì)社
• 主分類號(hào): C07C213/06
• 分類號(hào): C07C213/06;C07C217/28;C07D295/08;C07B61/00
• 代理公司: 北京泛誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11298
• 代理人: 楊本良;文琦

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及用于制造含有叔氨基的脂質(zhì)的方法。

背景技術(shù)

近年來，基因療法成為能夠預(yù)期在基因水平上使引起各種疾病的異常情況恢復(fù)和正常化的醫(yī)學(xué)治療。然而，基因是非常不穩(wěn)定的。例如，在將基因原樣給藥的情形中，基因經(jīng)歷由體內(nèi)的核酸酶等造成的分解。因此，用于基因療法的載體的選擇是非常重要的。

過去使用的病毒載體是表現(xiàn)出高度基因轉(zhuǎn)移效率的有效載體。然而，已經(jīng)報(bào)道了臨床試驗(yàn)與死亡相關(guān)聯(lián)的情況，使得對(duì)安全性存在顧慮。因此，具有高安全性和高基因?qū)胄实姆遣《据d體的開發(fā)已變成主流，并且已在世界各地進(jìn)行積極研究。

非病毒載體包括諸如聚乙烯亞胺的陽(yáng)離子聚合物與基因的復(fù)合物(多聚物-核酸復(fù)合物(polyplex))，和由陽(yáng)離子脂質(zhì)制成的脂質(zhì)體與基因的復(fù)合物(脂質(zhì)-核酸復(fù)合物(lipoplex))。

最重要的是，由于容易被官能化以便取決于所混合的脂質(zhì)的類型而在血液中具有提高的持留性、積累到靶細(xì)胞等，脂質(zhì)-核酸復(fù)合物是目前最通常使用的載體，并且極有希望進(jìn)入實(shí)際應(yīng)用。

對(duì)于脂質(zhì)-核酸復(fù)合物的典型實(shí)例來說，Wheeler等報(bào)道了將含有用作致融脂質(zhì)的二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)、陽(yáng)離子脂質(zhì)等的穩(wěn)定化的質(zhì)粒脂質(zhì)離子(SPLP)用聚乙二醇脂質(zhì)包衣(NPL?1)。在所述報(bào)告中，對(duì)于陽(yáng)離子脂質(zhì)來說，為了提高藥物遞送效率，使用具有致融性質(zhì)并含有一個(gè)不飽和鍵例如油烯基的脂質(zhì)(例如DODAC(二油烯基二甲基氯化銨))。

此外，有報(bào)告指出，通過使用具有至少兩個(gè)不飽和鍵例如亞油烯基并表現(xiàn)出提高的柔性的陽(yáng)離子脂質(zhì)，藥物遞送效率與以往相比進(jìn)一步提高(PTL?1)。另外，存在著使用類似的陽(yáng)離子脂質(zhì)的報(bào)告(PTL?2)。

對(duì)于其中使用的陽(yáng)離子脂質(zhì)來說，脂質(zhì)部分與具有陽(yáng)離子基團(tuán)的骨架使用醚基鍵合。與脂質(zhì)部分和具有陽(yáng)離子基團(tuán)的骨架使用酯基鍵合的陽(yáng)離子脂質(zhì)等相反，由于不發(fā)生水解，因此表現(xiàn)出顯著的穩(wěn)定性。

一般來說，在合成這樣的包含具有醚基的鍵的陽(yáng)離子脂質(zhì)的情形中，使用Williamson等的方法，其中將具有陽(yáng)離子基團(tuán)和羥基的化合物與具有離去基團(tuán)的脂質(zhì)化合物在有機(jī)溶劑中，在強(qiáng)堿存在下，在高溫下反應(yīng)。用于制造陽(yáng)離子脂質(zhì)化合物的具體方法的實(shí)例，包括從含有陽(yáng)離子基團(tuán)(二甲基氨基)的3-二甲基氨基-1，2-丙二醇和長(zhǎng)鏈脂肪溴化物或長(zhǎng)鏈脂肪甲磺酸酯，在芳香化合物溶劑例如苯、甲苯或二甲苯中，在強(qiáng)堿催化劑例如氫氧化鈉或氫氧化鉀存在下，在高溫例如回流下進(jìn)行的生產(chǎn)(PTL?1和2)。

總的來說，已知在分子中具有夾在兩個(gè)順式形式的雙鍵之間的亞甲基的脂肪酸例如亞油酸，由于所述亞甲基具有高反應(yīng)性，因此在高溫、堿等的條件下容易被氧化并且容易異構(gòu)化。所述異構(gòu)化的脂肪酸(反式脂肪酸)表現(xiàn)出不同的生物活性。存在著例如過量攝入增加死亡風(fēng)險(xiǎn)的報(bào)告。因此，可能在體內(nèi)發(fā)揮不利效應(yīng)。

同時(shí)，已知具有一個(gè)雙鍵的脂肪酸例如油酸，由于在所述雙鍵的兩側(cè)包含亞甲基，因此也經(jīng)歷氧化，盡管反應(yīng)性與亞油酸等的分子中夾在相鄰的兩個(gè)順式形式的雙鍵之間的亞甲基的反應(yīng)性相比特別低，因此不容易發(fā)生異構(gòu)化。

[引用文獻(xiàn)列表]

[非專利文獻(xiàn)]

[NPL?1]Wheeler等，基因治療(Gene?Therapy)6：271-281(1999)

[專利文獻(xiàn)]

[PTL?1]日本未經(jīng)審查的專利申請(qǐng)公布(PCT申請(qǐng)的翻譯版本)No.2008-501729

[PTL?2]日本未經(jīng)審查的專利申請(qǐng)公布(PCT申請(qǐng)的翻譯版本)No.8-509953

發(fā)明內(nèi)容

[技術(shù)問題]

也就是說，為了通過相關(guān)領(lǐng)域中的方法，通過在分子中具有夾在相鄰的兩個(gè)順式形式的雙鍵之間的亞甲基的化合物，例如亞油烯基團(tuán)，的醚化獲得含有叔氨基的陽(yáng)離子脂質(zhì)，需要高溫和強(qiáng)堿條件。因此，存在著夾在順式形式的雙鍵之間的活性亞甲基的質(zhì)子被容易地抽出，發(fā)生從順式形式向反式形式的異構(gòu)化，并且在目標(biāo)物質(zhì)中含有許多異構(gòu)體的問題。

[解決問題的技術(shù)方案]

為了解決上述問題，本發(fā)明人進(jìn)行了深入研究。結(jié)果，在分子中具有至少一個(gè)夾在相鄰的兩個(gè)順式形式的雙鍵之間的亞甲基的陽(yáng)離子脂質(zhì)的生產(chǎn)中，成功實(shí)現(xiàn)了從順式形式向反式形式的異構(gòu)化的顯著抑制。

(1)一種用于制造含有叔氨基的脂質(zhì)的方法，該方法包括：

使(A)由下述式(I)所表示的化合物

R¹-X??...(I)