[發明專利]多重蛋白質定量標準物

有效

• 申請號: 201380034817.4
• 申請日: 2013-06-28
• 公開（公告）號: CN104471395B
• 公開（公告）日: 2017-05-03
• 發明（設計）人: J·S·西諾;D·C·伊;L·O·洛馬斯
• 申請（專利權）人: 生物輻射實驗室股份有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/58;G01N33/00
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司31100
• 代理人: 陶家蓉

相關專利申請的交叉引用

本申請要求2012年6月28日提交的美國臨時專利申請第61/665,425號的優先權，其通過引用全文納入本文。

技術領域

本發明屬于蛋白質檢測領域，具體涉及對凝膠電泳中的蛋白質定量。

背景

凝膠電泳，包括聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)，是用于評估蛋白質或多肽的分子量的常見實驗室技術。凝膠電泳用于分離蛋白質，所述分離基于它們的電荷、大小和/或分子量。在非變性條件下，蛋白質可基于其荷質比分離，并且電泳遷移率受天然蛋白質的大小和形狀影響。在變性條件下，例如存在陰離子去污劑例如十二烷基磺酸鈉(SDS)，蛋白質會基于其分子量分離。陰離子去污劑會使蛋白質解折疊并提供均勻的負電荷密度，從而蛋白質的電泳遷移率是分子量的對數的線性函數。

對樣品中蛋白質的量定量的方法為本領域已知，包括Bradford試驗。Bradford試驗依賴由已知蛋白質標準物生成的標準曲線來測定未知蛋白質的總量。然而，Bradford試驗通常使用含有感興趣蛋白質的溶液進行。若感興趣蛋白質的消光系數已知，可使用分光光度法測量純化的蛋白質的量。蛋白質的量還可通過偶聯同位素標記方法(如ICAT、iTRAQ和串聯治療標簽)的質譜來測定。然而，分光光度法受限用于溶液中純蛋白質的測量。當前用于對SDS-PAGE凝膠中蛋白質定量的方法涉及從已知質量的純化蛋白質的系列稀釋液生成標準曲線，其中使各稀釋液在凝膠的分開泳道中與含感興趣靶蛋白的樣品平行電泳。

本發明公開了用于對電泳凝膠中蛋白質的量定量的蛋白質定量標準物，以及測定凝膠中蛋白質的量的方法，而無需生成已知蛋白質質量的系列稀釋或制備感興趣蛋白質的純化樣品。

發明內容

本發明描述了蛋白質定量標準物，其可用于測定電泳凝膠中靶蛋白的質量(即含量或量)。所述標準物包含可用于生成質量標準曲線的未染色多肽組，用于測定所述凝膠中靶多肽的量。所述未染色多肽組可在混合物中提供，所述混合物適于加樣和在凝膠的一個泳道中電泳分離。所述蛋白質定量標準物還可包括預染色多肽組，其可用作測定靶多肽分子量(即大小)的分子量梯度。因此，在一些實施方式中，所述蛋白質定量標準物可用于測定電泳凝膠中靶蛋白的分子量和質量。所述預染色多肽組和未染色多肽組可在混合物中提供，所述混合物適于加樣和在凝膠的一個泳道中電泳分離。在電泳分離時，所述預染色多肽顯示為凝膠上的條帶，使得使用者可確定不同大小多肽之間的分離程度。靶蛋白通常在凝膠的另一泳道中加樣，隨后電泳分離。

因此，在一個方面，提供一種可加樣到電泳凝膠的一條泳道中的蛋白質定量標準物，所述標準物包括未染色多肽組，其中所述未染色多肽組的成員具有不同的電泳遷移率并且以不同量存在，從而所述標準物適于從凝膠的一條泳道中生成蛋白質質量標準曲線。在一個實施方式中，所述未染色多肽組的不同成員具有不同的分子量和/或不同的電泳遷移率。在一個實施方式中，所述未染色多肽組的各成員具有與所述未染色多肽組的其他成員不同的分子量和/或不同的電泳遷移率。

在一些實施方式中，所述蛋白質定量標準物還包含具有不同分子量和/或不同電泳遷移率的預染色多肽組，從而所述標準物適于在凝膠的一條泳道中生成分子量梯度和蛋白質質量標準。在一個實施方式中，所述預染色多肽組的不同成員具有不同的分子量和/或不同的電泳遷移率。在一個實施方式中，所述預染色多肽組的各成員具有與所述預染色多肽組的其他成員不同的分子量和/或不同的電泳遷移率。在一些實施方式中，所述標準物的至少一種預染色多肽和至少一種未染色多肽具有不同電泳遷移率。

在一些實施方式中，所述蛋白質定量標準物在共同混合物中包含具有不同分子量的預染色多肽組和具有不同分子量的未染色多肽組，其中所述未染色多肽組的成員具有不同電泳遷移率且以不同的量存在，從而所述標準物適于在電泳凝膠的一條泳道中生成分子量梯度和蛋白質質量標準。所述蛋白質質量標準可用于從凝膠的一條泳道生成蛋白質定量標準曲線。