[發(fā)明專(zhuān)利]應(yīng)用MALDI?TOFF質(zhì)譜分析法的侵染性真菌感染的體外診斷方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201380034007.9
• 申請(qǐng)日: 2013-06-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104411833B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-11-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: D.普蘭;B.森迪德;Y.格拉德?tīng)?/a>;N.弗朗索瓦
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 里爾大學(xué)地區(qū)醫(yī)療中心;里爾法律與醫(yī)療衛(wèi)生大學(xué);里爾科學(xué)技術(shù)大學(xué);國(guó)家科學(xué)研究中心
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/04
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/04;G01N33/68
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務(wù)所11105
• 代理人: 張文輝

1.選自多糖、寡糖和單糖的所關(guān)注的化合物在制備用于病原性真菌微生物引起的侵染性真菌感染的體外診斷的試劑盒中的用途，其中，所述試劑盒用于以下方法：

-提供由哺乳動(dòng)物獲得的并含有蛋白質(zhì)和/或脂質(zhì)和/或鹽，和/或易于與所述的蛋白質(zhì)和/或脂質(zhì)和/或鹽形成復(fù)合物的多糖和/或寡糖和/或單糖的生物液體樣品；

-處理所述樣品，用于提取所述多糖和/或寡糖和/或單糖；

-利用MALDI-TOF質(zhì)譜分析法確定所提取的多糖、寡糖和/或單糖中是否存在來(lái)源于所述真菌微生物、且選自所述多糖、寡糖和單糖的至少一種所關(guān)注的化合物；

-推斷如果所述樣品中存在所關(guān)注的化合物，則所述的哺乳動(dòng)物正遭受侵染性真菌感染，

其中，所述的所關(guān)注化合物是海藻糖，并且所述病源性真菌微生物是白色念珠菌。

2.權(quán)利要求1的用途，其中，為了從所述的生物樣品提取所述的多糖和/或寡糖和/或單糖：

-通過(guò)沉淀/凝聚大多數(shù)所述蛋白質(zhì)或所述脂質(zhì)，分離包含于所述生物液體樣品中的所述復(fù)合物；

-離心所述的樣品，使上清與固相分離；

-回收上清；

-通過(guò)反向色譜法將包含于上清液中的所述多糖和/或寡糖和/或單糖與殘余蛋白質(zhì)和殘余脂質(zhì)分離，并且通過(guò)吸收色譜法使所述的多糖和/或寡糖和/或單糖與所述的鹽分離。

3.權(quán)利要求2的用途，其中，為了解離所述的復(fù)合物，向所述樣品中添加絡(luò)合劑并且將所述的混合物加熱至沸騰。

4.權(quán)利要求3的用途，其中所述絡(luò)合劑是堿。

5.權(quán)利要求3的用途，其中所述絡(luò)合劑是EDTA。

6.權(quán)利要求3的用途，其中將所述的混合物加熱至100℃和140℃之間的溫度。

7.權(quán)利要求3的用途，其中將所述的混合物加熱至接近120℃的溫度。

8.權(quán)利要求2-7任一項(xiàng)的用途，其中，先進(jìn)行反向色譜法，之后進(jìn)行吸收色譜法。

9.權(quán)利要求1的用途，其中，含疏水相的柱用于反向色譜法，含活性碳的柱用于吸收色譜法。

10.權(quán)利要求1的用途，其特征在于，所述的所關(guān)注化合物具有1000以下的m/z比率。

11.權(quán)利要求1的用途，其中，加入至少一種易于作用于所述多糖和/或寡糖的酶，和/或進(jìn)行化學(xué)處理，以切斷由于所述復(fù)合物的分解所產(chǎn)生的所述多糖和/或寡糖鏈，結(jié)果潛在地增加所述所關(guān)注化合物的量。

12.權(quán)利要求1的用途，其中，向所述樣品中加入已知量的至少一種標(biāo)準(zhǔn)化合物，以便于將由所述給定的所關(guān)注化合物獲得的信號(hào)與由所述標(biāo)準(zhǔn)化合物獲得的信號(hào)相比較，由此確定所述樣品中包含的所關(guān)注化合物的量。

13.權(quán)利要求12的用途，其中，確定來(lái)自給定的所關(guān)注化合物的信號(hào)的強(qiáng)度與遍在的內(nèi)源信號(hào)的強(qiáng)度的比率，所述內(nèi)源信號(hào)之前確定并可能特異于獲取所述樣品的生物液體的類(lèi)型，由上述的結(jié)果可定量所述樣品中包含的所關(guān)注化合物。

14.權(quán)利要求1的用途，其中，所述的生物液體選自：動(dòng)脈或靜脈血、血清、生殖器粘膜的液體、和呼吸道的液體。

15.權(quán)利要求1的用途，其中，所述的生物液體選自：來(lái)自支氣管肺泡灌洗、支氣管抽吸、氣管抽吸、咳痰、唾液的液體、用于收集皮膚和體被部分的液體、滲漏液和來(lái)自閉腔的液體。

16.權(quán)利要求1的用途，其中，所述的生物液體選自：腦髓液、來(lái)自胃腸道或尿道的液體，以及來(lái)自研磨活檢碎片的液體。

17.能用于上述任一權(quán)利要求的用途中的試劑盒，其中，所述的試劑盒包括：

-至少一種包含能實(shí)施反向色譜法的固體疏水相的起始支持物；

-至少一種第二容器，其包含進(jìn)料口、輸出口、以及在進(jìn)料口和輸出口之間的固體活性碳填充物；

所述試劑盒還包含給定量的標(biāo)準(zhǔn)化合物，所述的標(biāo)準(zhǔn)化合物是海藻糖。

18.權(quán)利要求17的試劑盒，其中，所述的填充物通過(guò)混合等量活性碳和硅藻土來(lái)制備。

19.權(quán)利要求17或18的試劑盒，其中，所述的疏水固相以相分離的形式存在并包含磁性材料。