[發明專利]對孢囊線蟲具有抗性的大豆

有效

• 申請號: 201380033848.8
• 申請日: 2013-05-30
• 公開（公告）號: CN104640439B
• 公開（公告）日: 2018-05-22
• 發明（設計）人: K.梅克塞姆;劉世名;P.K.肯多思;M.G.米楚姆
• 申請（專利權）人: 南伊利諾伊大學評議會;密蘇里大學學監
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H1/00;A01H5/00;C12N5/04;A01H6/54
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李波;梁謀

1.用于制備對大豆孢囊線蟲(SCN)具有抗性的轉基因大豆植物的方法，其中用人工DNA構建體轉化大豆植物，所述人工DNA構建體包含以下在5'至3'轉錄方向上作為可操作地相關聯的組分：

啟動子，其在大豆植物中起作用；

多核苷酸，其如以下核苷酸序列所示：

編碼通過在SEQ ID NO:2中引入P130R和N358Y的兩個氨基酸取代而獲得的具有絲氨酸羥甲基轉移酶活性的多肽的核苷酸序列；以及

轉錄終止序列；

其中所述轉基因大豆植物展現增加的SCN抗性。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述多核苷酸如通過在SEQ ID NO:1中引入C389G和A1072T的兩個核酸取代而獲得的核苷酸序列所示，并且所述多核苷酸編碼具有絲氨酸羥甲基轉移酶活性的多肽。

3.根據權利要求1-2中任一項所述的方法，其中所述啟動子包括誘導型啟動子或組織特異性啟動子。

4.根據權利要求1-2中任一項所述的方法，其中所述啟動子包括線蟲誘導型啟動子。

5.根據權利要求1-2中任一項所述的方法，其中所述啟動子是野生型Forrest SHMT啟動子。

6.根據權利要求1-2中任一項所述的方法，其中所述啟動子如通過在SEQ ID NO:4中引入C1080T和C2244T的兩個核酸取代和一個核酸缺失-2069A而獲得的序列所示。

7.制備具有大豆孢囊線蟲(SCN)抗性的農藝學優良大豆品種的植物的方法，所述植物包含突變的GmSHMT等位基因，所述突變的GmSHMT等位基因編碼通過在SEQ ID NO:2中引入P130R和N358Y的兩個氨基酸取代而獲得的具有絲氨酸羥甲基轉移酶活性的多肽，所述方法包括以下步驟：

(a)將第一與第二大豆植物雜交，其中所述第一和第二大豆植物共同地包含所述突變的GmSHMT等位基因，從而產生SCN抗性表型，且其中所述第一和第二大豆植物共同地包含能夠賦予所述第一和第二大豆植物的子代植物農藝學優良特性的種質；以及

(b)測定由所述雜交產生的子代大豆植物的農藝學優良特性和SCN抗性；以及

(c)選擇包含所述SCN抗性表型和農藝學優良特性的至少第一子代大豆植物以獲得所述的植物。

8.一種人工DNA構建體，其包含以下在5'至3'轉錄方向上作為可操作地相關聯的組分：

啟動子，其在大豆植物中起作用；

多核苷酸，其如以下核苷酸序列所示：

編碼通過在SEQ ID NO:2中引入P130R和N358Y的兩個氨基酸取代而獲得的具有絲氨酸羥甲基轉移酶活性的多肽的核苷酸序列；以及

轉錄終止序列。

9.根據權利要求8所述的人工DNA構建體，其中所述多核苷酸如通過在SEQ ID NO:1中引入C389G和A1072T的兩個核酸取代而獲得的核苷酸序列所示。

10.一種增加大豆植物的大豆孢囊線蟲(SCN)抗性的方法，其包括：

用人工DNA構建體來轉化大豆植物，所述人工DNA構建體包含以下在5'至3'轉錄方向上作為可操作地相關聯的組分：

啟動子，其在大豆植物中起作用；

多核苷酸，其如以下核苷酸序列所示：

編碼通過在SEQ ID NO:2中引入P130R和N358Y的兩個氨基酸取代而獲得的具有絲氨酸羥甲基轉移酶活性的多肽的核苷酸序列；以及

轉錄終止序列；

其中用所述人工DNA構建體轉化的大豆植物與不含所述DNA構建體的植物相比展現增加的SCN抗性。

11.根據權利要求10所述的增加大豆植物的大豆孢囊線蟲(SCN)抗性的方法，其中所述多核苷酸如通過在SEQ ID NO:1中引入C389G和A1072T的兩個核酸取代而獲得的核苷酸序列所示。