[發明專利]青銅蝽防治劑

在審

• 申請號: 201380032751.5
• 申請日: 2013-04-19
• 公開（公告）號: CN104395474A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發明（設計）人: D·阿維薩爾;D·西格爾;Z·薩尼
• 申請（專利權）人: 富優基尼以色列股份有限公司
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/113
• 代理公司: 北京林達劉知識產權代理事務所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

序列表

本申請包含以ASCII格式經電子存檔提交的序列表，在此將其全部內容引入以作參考。將2013年4月18日制作的所述ASCII副本命名為30407-0003WO1_SL.txt，其大小為54,868字節。

技術領域

本發明涉及昆蟲物種中雙鏈RNA(dsRNA)介導的基因沉默領域。

背景技術

Thaumastocoris?peregrinus(青銅蝽(Bronze?bug))為僅發現于桉樹上的吸汁害蟲(sap-sucking?pest)(半翅目(Order?Hemiptera)：櫚蝽科(Thaumastocoridae))。青銅蝽侵擾已發生于南半球并對澳大利亞、非洲和南美洲的商業桉樹種植構成威脅。例如在赤桉(E.camaldulensis)、細葉桉(E.tereticornis)和史密斯桉(E.smithii)以及雜交種巨赤桉(E.grandis×E.camaldulensis)和尾巨桉(E.grandis×E.urophylla)等物種中觀察到侵擾。青銅蝽感染降低了樹木的光合能力，導致矮化生長。嚴重的侵擾可造成樹木死亡。對防治桉樹的青銅蝽感染所做的努力已包括嘗試將天然抗性植物與天然捕食者隔離。然而，這種努力已遇到限制或不成功。

青銅蝽侵擾的某些特征導致難以利用化學農藥防治侵擾。青銅蝽侵擾趨于迅速蔓延。侵擾的防治因而將不可避免地重復噴灑。此外，青銅蝽趨于在中間-樹冠聚集，這難以用殺蟲劑滲透。即使可行，化學殺蟲劑防治也具有缺點。化學殺蟲劑可能不利于環境，不是選擇性的，且可能對非目標作物和動物群有害。化學殺蟲劑存留于環境中并通常代謝緩慢，或根本不代謝。化學殺蟲劑在食物鏈中，特別是在較高的捕食者物種內積累，從中充當誘變劑和/或致癌物以引起不可逆且有害的遺傳修飾。此外，由于反復使用相同的殺蟲劑或具有相同作用模式的殺蟲劑可使作物害蟲發展出對化學殺蟲劑的抗性。

RNA干擾或“RNAi”為通過與要下調的靶基因區序列互補的雙鏈RNA(dsRNA)引發的序列特異的基因表達下調的過程(還稱作“基因沉默”或“RNA介導的基因沉默”)。多細胞生物中借助RNA干擾(RNAi)的靶基因下調已成為完善的技術。美國專利申請公布US?2009/0285784?A1和US?2009/0298787涉及dsRNA作為昆蟲防治劑，并在此將其各自的全部內容引入于此以作參考。美國專利6,506,559號、美國專利申請公布2003/00150017?A1、國際公布WO?00/01846、WO?01/37654、WO?2005/019408、WO?2005/049841、WO?05/047300涉及RNAi保護植物抵抗昆蟲的用途。2012年3月30日提交的國際申請PCT/US12/31423涉及青銅蝽(Gall?Wasp)家族中桉樹害蟲的RNA-介導的防治。在此將前述專利和公布的申請的全部內容分別引入于此以作參考。

發明內容

本發明部分地基于發明人的桉樹青銅蝽入侵物種，Thaumastocoris?peregrinus(下文為“Tp”或“青銅蝽”)的基因測序。在某些方面，本發明由此提供青銅蝽核酸、其衍生物和此類核酸和衍生物作為青銅蝽防治劑的用途。

在某些方面，本發明提供分離的核酸，所述核酸在高嚴格雜交條件下與SEQ?ID?NO:1-59和74-87中示出的序列及其互補序列選擇性雜交。

在某些方面，本發明提供分離的核酸，所述核酸與SEQ?ID?NO:1-59和74-87中示出的序列及其互補序列的同一性為90-99.99％。

在某些方面，本發明提供分離的核酸，所述核酸包括SEQ?ID?NO:1-59和74-87中示出的序列及其互補序列的至少17個鄰接核苷酸。

在某些方面，本發明提供來自青銅蝽的核酸，所述核酸包括與所述核酸的蜜蜂直向同源物(ortholog)的同一性為約80％以下的上述所示的核酸。

在某些方面，本發明提供包括可操作地連接至表達控制序列(expression?control?sequence)的來自青銅蝽的核酸或此類序列的反向互補體的載體。

在某些方面，本發明提供宿主細胞，其轉化有和/或承載有包括可操作地連接至表達控制序列的來自青銅蝽的核酸或此類序列的反向互補體的載體。