[發(fā)明專利]有用微生物和目標(biāo)物質(zhì)的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201380032679.6
• 申請(qǐng)日: 2013-07-03
• 公開（公告）號(hào): CN104379729B
• 公開（公告）日: 2020-07-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 飯?zhí)锛孜?/a>;巖崎卓己;西達(dá)也
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 花王株式會(huì)社
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12P7/42;C12P7/46;C12P9/00;C12P13/00;C12P13/02;C12P13/06;C12P13/08;C12P13/14;C12P13/20;C12N15/09;C12R1/15;C12R1/19
• 代理公司: 北京尚誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11322
• 代理人: 龍淳

1.原核生物，該原核生物具有下述的(a)～(d)所述的所有性質(zhì)，以調(diào)節(jié)將由碳源生成生長(zhǎng)所必須的代謝物M的生物合成途徑中作為中間代謝物的化合物P轉(zhuǎn)換成代謝物M的酶X的表達(dá)量，從而使化合物P蓄積，

(a)在與從該原核生物所能利用的碳源到化合物P的生物合成有關(guān)的酶組中，任意一個(gè)以上的酶的活性較該原核生物的野生株有所增強(qiáng)；

(b)通過在編碼酶X的蛋白的野生型基因x的翻譯區(qū)、該基因的翻譯調(diào)節(jié)區(qū)或促進(jìn)基因x轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子區(qū)中具有1個(gè)以上的核苷酸的取代、缺失或添加的突變，酶X的活性缺損或降低；

(c)利用與上述促進(jìn)基因x轉(zhuǎn)錄的本來的啟動(dòng)子不同、且轉(zhuǎn)錄被抑制物R的蛋白抑制的啟動(dòng)子A來控制編碼活性型酶X的DNA的轉(zhuǎn)錄；

(d)具有1拷貝以上的編碼抑制物R的蛋白的基因z，該基因的轉(zhuǎn)錄被該基因的本來的啟動(dòng)子和/或不同于該啟動(dòng)子的誘導(dǎo)啟動(dòng)子B控制，

上述編碼抑制物R的蛋白的基因z為谷氨酸棒狀桿菌ATCC13032株的vanR基因、pcaR基因、或rhcR基因，

上述啟動(dòng)子B是通過添加選自阿魏酸、香草酸、香蘭素、苯甲酸、3-羥基苯甲酸、間苯二酚、4-羥基苯甲酸、2,4-二羥基苯甲酸、果糖和蔗糖的化合物而誘導(dǎo)的啟動(dòng)子，

上述啟動(dòng)子A為谷氨酸棒狀桿菌ATCC13032株的vanA基因的啟動(dòng)子、pobA基因的啟動(dòng)子、pcaH基因的啟動(dòng)子、或rhcH基因的啟動(dòng)子，

上述化合物P和上述代謝物M的組合為下述(f)：

(f)化合物P為3-脫氫莽草酸、代謝物M為莽草酸，

上述原核生物為谷氨酸棒狀桿菌或大腸桿菌，

上述酶X為莽草酸脫氫酶，

上述(a)中所述的酶選自3-脫氫奎尼酸合成酶、3-脫氫奎尼酸脫水酶、3-脫氧-D-阿糖基庚糖酮酸-7-磷酸合成酶、轉(zhuǎn)酮醇酶、轉(zhuǎn)醛醇酶、葡萄糖-6-磷酸1-脫氫酶、磷酸烯醇式丙酮酸合成酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶中的任意一個(gè)以上。

2.權(quán)利要求1所述的原核生物，其特征在于：性質(zhì)(b)所述的促進(jìn)基因x轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子區(qū)中的取代突變是將該啟動(dòng)子的整個(gè)區(qū)域或一部分區(qū)域取代成性質(zhì)(c)所述的啟動(dòng)子A的DNA的突變。

3.權(quán)利要求1所述的原核生物，其特征在于：在上述原核生物所具有的代謝化合物P的酶中，酶X以外的任意一個(gè)以上的代謝酶的活性缺損或降低。

4.化合物P的制備方法，其特征在于：在抑制了啟動(dòng)子A轉(zhuǎn)錄的狀態(tài)下、在碳源的存在下培養(yǎng)權(quán)利要求1～3中任一項(xiàng)所述的原核生物。

5.化合物P的制備方法，其特征在于：在抑制了啟動(dòng)子A轉(zhuǎn)錄的狀態(tài)下、在碳源的存在下培養(yǎng)權(quán)利要求1～3中任一項(xiàng)所述的原核生物，之后施加誘導(dǎo)啟動(dòng)子B轉(zhuǎn)錄的處理，使抑制物R的蛋白表達(dá)量增加，從而減少代謝物M的生成量。

6.化合物P的制備方法，其特征在于：在解除了啟動(dòng)子A的轉(zhuǎn)錄抑制的狀態(tài)下、在碳源的存在下培養(yǎng)權(quán)利要求1～3中任一項(xiàng)所述的原核生物，之后施加誘導(dǎo)啟動(dòng)子B轉(zhuǎn)錄的處理，使抑制物R的蛋白表達(dá)量增加，從而減少代謝物M的生成量。