[發明專利]用于產生細胞培養基的方法

在審

• 申請號: 201380031513.2
• 申請日: 2013-05-17
• 公開（公告）號: CN104395459A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發明（設計）人: J·馮哈根
• 申請（專利權）人: 默克專利有限公司
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;C12N5/02
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 黃革生;劉金輝

本發明涉及用于生產干粉細胞培養基的方法。制備和使用通過共凍干法產生的混合顆粒產生了均質混合的細胞培養基。

發明背景

水溶液中的細胞培養基可以提供環境，其支持和維持細胞生長和/或為某些產物的靶向產生提供維持期望的生理學細胞條件。

取決于培養的生物的類型和/或應當支持的目標生理學狀態，細胞培養基包含組分(通常一百種以上的不同組分)的復雜混合物。

增殖哺乳動物、昆蟲或植物細胞所需的細胞培養基通常比支持細菌、酵母或真菌生長的培養基復雜得多。

研發的第一種細胞培養基由未確定成分組分，例如血漿、血清、胚胎提取物或其他未確定成分生物提取物或蛋白胨組成。因此，隨著化學成分確知培養基的研發，培養基得到了重大的改進。化學成分確知培養基通常包含但不特定地限于氨基酸、維生素、金屬鹽、抗氧化劑、螯合劑、生長因子、緩沖液、激素，以及本領域技術人員已知的多種物質。

一些細胞培養基提供為無菌水溶液。液體培養基的缺點是其減少的貯藏期限以及難以運輸和儲存。因此，目前許多細胞培養基都提供為精磨的干粉混合物。通常出于與其他補充物一起溶解于水和/或水溶液以及設計的溶解狀態為目的而生產它們，用于為細胞提供生長和/或從所述細胞中產生生物藥物的基本營養物質。

以粉末形式生產細胞培養基是非常關鍵的。通常通過混合和研磨方法，例如球磨法混合培養基的經干燥組分來生產粉末培養基。

在研磨方法中，在另一方面，通常很難產生均質的混合物，因為需要勻漿多達9個數量級差異濃度的成分。這意為需要將1千克培養基組合物中存在的微克以下的組分均質地分配在細胞培養基中。

已經通過凍干預先制備的液體培養基來試圖克服這些困難。然而，在凍干方法中，一些培養基組分可能變得不溶或者在凍干后聚集，使得難以或者不能再增溶。此外，如果嘗試通過例如凍干法這樣的方法來產生粉末補充物，許多培養基補充物，特別是血清補充物例如FBS，都顯示出活性的基本損失或者表現出完全的失活。

因此，存在提供用于生產干粉細胞培養基改進方法的明確需求，該方法不具有上述缺點。

發明概述

已經發現，可以生產均質地分配的尤其是以低量存在的組分的粉末細胞培養基。這可以通過制備至少一種低豐度組分和以更高濃度在培養基中存在的一種載體組分的混合顆粒來實現。可以通過共凍干法制備這些混合的顆粒，然后可以加入到組分的混合物中來進行研磨。

因此，本發明涉及生產細胞培養基的方法，其包括

a)共凍干細胞培養基的至少兩種組分

b)將步驟a)中產生的一種或多種共凍干物與細胞培養基的其他組分混合

c)將步驟b)的混合物進行研磨。

在優選的實施方案中，步驟a)中一種組分(低豐度組分)的量小于其他組分(高豐度組分)的量的5％(按重量計)。這意為，如果使用100g的高豐度組分，那么使用了小于5g的低豐度組分。

在優選的實施方案中，高豐度組分是氯化鈉(NaCl)、氯化鉀(KCl)、氯化鈣(CaCl₂)、硫酸鎂(MgSO₄)或氯化鎂(MgCl₂)。

在另一個優選的實施方案中，在步驟a)中，通過產生組分的水溶液、冷凍混合物并在減壓下去除液體來進行共凍干。

在另一個優選的實施方案中，在盤擊式研磨機(jet?mill)、菲茲研磨機(fitz?mill)或噴射式研磨機(jet?mill)中研磨來自步驟b)的混合物。

在另一個優選的實施方案中，在研磨之前將來自步驟b)的混合物冷卻至0℃以下的溫度。

在另一個實施方案中，通過分別共凍干細胞培養基的至少兩種組分，來產生兩種或多種不同的共凍干物。

本發明還涉及通過本發明方法生產的粉末細胞培養基。

本發明還涉及包含一種或多種共凍干物的粉末細胞培養基。

在優選的實施方案中，粉末細胞培養基包含兩種或多種共凍干物。

在優選的實施方案中，在至少一種共凍干物中，至少一種組分的量小于至少一種其他組分的量的1％。

在另一個優選的實施方案中，至少一種共凍干物包含氯化鈉(NaCl)、氯化鉀(KCl)、氯化鈣(CaCl₂)、氯化鎂(MgCl₂)或硫酸鎂(MgSO₄)。

發明描述

圖1顯示了與其他培養基比較，使用本發明培養基達到的CHO?S細胞的完整存活的細胞密度。其他細節可見于實施例3。