[發明專利]使人胚胎干細胞分化為胰腺內分泌細胞

在審

• 申請號: 201380031065.6
• 申請日: 2013-06-13
• 公開（公告）號: CN104603262A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發明（設計）人: J.達維斯;J.劉
• 申請（專利權）人: 詹森生物科技公司
• 主分類號: C12N5/0735
• 分類號: C12N5/0735;C12N5/02;C07D471/04;C07D233/56
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 孔青;梁謀

1.一種使多能細胞擴增和分化的方法，所述方法包括以下步驟：

a.?培養多能細胞，以及

b.?用GSK-3B酶活性抑制劑處理所述多能細胞。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述多能細胞為胚胎干細胞。

3.根據權利要求1所述的方法，其中所述多能細胞為衍生自胚胎干細胞的表達多能標志物的細胞。

4.根據權利要求3所述的方法，其中所述表達多能標志物的細胞表達選自下列多能標志物中的至少一種：ABCG2、cripto、FoxD3、Connexin43、Connexin45、Oct4、SOX-2、Nanog、hTERT、UTF-1、ZFP42、SSEA-3、SSEA-4、Tra1-60和Tra1-81。

5.根據權利要求1所述的方法，其中所述多能細胞分化成表達定形內胚層譜系特征性標志物的細胞。

6.根據權利要求1所述的方法，其中將所述多能細胞用GSK-3B酶活性抑制劑處理約1至約72小時。

7.根據權利要求1所述的方法，其中將所述多能細胞用GSK-3B酶活性抑制劑處理約12至約48小時。

8.根據權利要求1所述的方法，其中將所述多能細胞用GSK-3B酶活性抑制劑處理約48小時。

9.根據權利要求1所述的方法，其中所述GSK-3B酶活性抑制劑以約100nM至約100μM的濃度使用。

10.根據權利要求1所述的方法，其中所述GSK-3B酶活性抑制劑以約1μM至約10μM的濃度使用。

11.根據權利要求1所述的方法，其中所述GSK-3B酶活性抑制劑以約10μM的濃度使用。

12.根據權利要求1所述的方法，其中所述GSK-3B酶活性抑制劑為式(I)的化合物：

式(I)。

13.根據權利要求12所述的方法，其中R₁為苯基；取代的苯基，其中所述苯基取代基選自C_1-5烷基、鹵素、硝基、三氟甲基和腈；或嘧啶基。

14.根據權利要求12所述的方法，其中R₂為苯基；取代的苯基，其中所述苯基取代基選自C_1-5烷基、鹵素、硝基、三氟甲基和腈；或任選地被C_1-4烷基取代的嘧啶基，并且R₁和R₂中的至少一者為嘧啶基。

15.根據權利要求12所述的方法，其中R₃為氫；2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基；C_1-5烷氧基羰基；芳氧基羰基；芳基C_1-5烷氧基羰基；芳基C_1-5烷基；取代的芳基C_1-5烷基，其中所述一個或多個芳基取代基獨立地選自C_1-5烷基、C_1-5烷氧基、鹵素、氨基、C_1-5烷基氨基和二C_1-5烷基氨基；鄰苯二甲酰亞胺基C_1-5烷基；氨基C_1-5烷基；二氨基C_1-5烷基；琥珀酰亞胺基C_1-5烷基；C_1-5烷基羰基；芳基羰基；C_1-5烷基羰基C_1-5烷基；和芳氧基羰基C_1-5烷基。

16.根據權利要求12所述的方法，其中R₄為-(A)-(CH₂)_q-X。

17.根據權利要求16所述的方法，其中A為亞乙烯基、亞乙炔基或。

18.根據權利要求17所述的方法，其中R₅選自氫、C_1-5烷基、苯基和苯基C_1-5烷基。

19.根據權利要求16所述的方法，其中q為0-9。