[發明專利]用于量化樣品中核酸序列的組合物和方法

有效

• 申請號: 201380029891.7
• 申請日: 2013-04-09
• 公開（公告）號: CN104685066B
• 公開（公告）日: 2021-09-21
• 發明（設計）人: 丹尼爾·謝弗;斯蒂芬·A·朱迪斯
• 申請（專利權）人: 一龍公司;丹尼爾·謝弗;斯蒂芬·A·朱迪斯
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 鄭斌;彭鯤鵬

1.量化切口和延伸擴增反應中特異性產物的方法，所述方法包括：

(a)在基本上等溫條件下，使靶核酸分子與以下接觸：聚合酶、兩種或更多種引物寡核苷酸、切口酶、以及可檢測的多核苷酸探針，所述切口酶結合雙鏈DNA中的識別序列并且切割所述雙鏈DNA中的一條鏈，其中至少一種引物寡核苷酸從5’至3’包含：(i)切口酶識別序列；(ii)與所述靶核酸分子互補的序列；以及(iii)定位在與所述靶核酸分子互補的序列的3’端的5個連續的2’-O-甲基修飾的核苷酸；

(b)產生包含至少一部分所述靶核酸分子的多個擴增子；并且

(c)檢測特異性針對與所述靶核酸分子或其擴增子雜交的寡核苷酸探針的信號，其中所述信號表明在樣品中存在的所述靶核酸分子或其擴增子的量。

2.權利要求1所述的方法，其中至少另外的一種引物寡核苷酸從5’至3’包含：(i)切口酶識別序列；(ii)與所述靶核酸分子互補的序列；以及(iii)定位在與所述靶核酸分子互補的序列的5’端的5個連續的2’修飾的核苷酸，并且其與切口位點隔開1、2、3、4、5或更多個未修飾的核苷酸。

3.量化切口和延伸擴增反應中特異性產物的方法，所述方法包括：

(a)在基本上等溫條件下，使靶核酸分子與以下接觸：聚合酶、兩種或更多種引物寡核苷酸、切口酶、以及可檢測的多核苷酸探針，所述切口酶結合雙鏈DNA中的識別序列并且切割所述雙鏈DNA中的一條鏈，其中至少一種引物寡核苷酸從5’至3’包含：(i)切口酶識別序列；(ii)與所述靶核酸分子互補的序列；以及(iii)定位在與所述靶核酸分子互補的序列的5’端的5個連續的2’-O-甲基修飾的核苷酸；

(b)產生包含至少一部分所述靶核酸分子的多個擴增子；并且

(c)檢測特異性針對與所述靶核酸分子或其擴增子雜交的寡核苷酸探針的信號，其中所述信號表明在樣品中存在的所述靶核酸分子或其擴增子的量。