[發明專利]用于生產葡萄糖聚合物和葡萄糖聚合物的水解產物的凈化回路的方法

有效

• 申請號: 201380029037.0
• 申請日: 2013-05-28
• 公開（公告）號: CN104364648B
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發明（設計）人: 索菲亞·杜萬特;赫拉·海新納-伽爾比;皮埃爾·拉諾;法布里斯·阿蘭;馬蒂厄·卡龐捷;安納斯·丹伊斯
• 申請（專利權）人: 羅蓋特兄弟公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N33/68
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司11219
• 代理人: 楊青,穆德駿

1.一種用于試驗一個生產步驟或多個生產步驟對葡萄糖聚合物或其水解產物中促炎分子的存在或其性質的影響或一個純化步驟或多個純化步驟對葡萄糖聚合物或其水解產物中促炎分子的存在或其性質的效力的方法，該方法包括：

a)提供葡萄糖聚合物或其水解產物；

b)檢測或測定步驟a)中提供的葡萄糖聚合物或其水解產物中的促炎分子；

c)對步驟a)中提供的葡萄糖聚合物或其水解產物進行該一個或多個生產或純化步驟；

d)檢測或測定步驟c)后獲得的葡萄糖聚合物或其水解產物中的促炎分子；

e)通過比較步驟b)和d)中檢測或測定的、所述葡萄糖聚合物或其水解產物中的促炎分子，確定步驟c)對這些促炎分子的存在或性質的效力，促炎分子或這些分子中的一些的量的減少指示步驟c)的效力；

其中用于檢測或測定這些葡萄糖聚合物或其水解產物中的促炎分子的步驟包括使用細胞系進行的體外炎癥應答試驗，其中該體外炎癥應答試驗包括使得這些葡萄糖聚合物或其水解產物與以下各項相接觸：

a.表達TLR2受體和報告基因的細胞系，該報告基因的轉錄是在TLR2信號通路的直接控制下，通過測量該報告基因的活性或信號來檢測或測定這些促炎分子；和

b.表達NOD2受體和報告基因的細胞系，該報告基因的轉錄是在NOD2信號通路的直接控制下，通過測量該報告基因的活性或信號來檢測或測定這些促炎分子，

其中所述促炎分子選自PGN(肽聚糖)、脂肽、PGN解聚產物和MDP(胞壁酰二肽)。

2.如權利要求1中所述的方法，其中該體外炎癥應答試驗還包括使得這些葡萄糖聚合物或其水解產物與未經受免疫受體轉染的對照系相接觸。

3.如權利要求1或2中所述的方法，其中該體外炎癥應答試驗還包括使得這些葡萄糖聚合物或其水解產物與MDP-或LPS-敏化的、巨噬細胞-分化的THP-1細胞系相接觸，通過測量由該細胞系產生的RANTES或TNF-α的量來檢測或測定這些促炎分子。

4.如權利要求1或2中所述的方法，其中該體外炎癥應答試驗還包括使得這些葡萄糖聚合物或其水解產物與用報告基因轉染的巨噬細胞系相接觸，該報告基因的轉錄是在炎癥信號通路的直接控制下，通過測量該報告基因的活性或信號來檢測或測定這些促炎分子。

5.如權利要求4中所述的方法，其中所述巨噬細胞系是Raw-Blue^TM系。

6.如權利要求1或2中所述的方法，其中表達TLR2受體和報告基因的細胞系是HEK-Blue^TM hTLR2系。

7.如權利要求1或2中所述的方法，其中該體外炎癥應答試驗還包括使得這些葡萄糖聚合物或其水解產物與表達TLR4受體和報告基因的細胞系相接觸，該報告基因的轉錄是在TLR4信號通路的直接控制下，通過測量該報告基因的活性或信號來檢測或測定這些促炎分子。

8.如權利要求7中所述的方法，其中所述細胞系是HEK-Blue^TM hTLR4系。

9.如權利要求1或2中所述的方法，其中表達NOD2受體和報告基因的細胞系是HEK-Blue^TM hNOD2系。

10.如權利要求2中所述的方法，其中所述對照系是HEK-Blue^TM Null2系。

11.如權利要求1或2中所述的方法，其中該一個或多個生產或純化步驟選自以下步驟：熱處理、酸化、穿過活性炭、穿過吸附樹脂、過濾、或化學或酶水解、或其組合。

12.如權利要求11中所述的方法，其中所述生產或純化步驟是超濾。

13.如權利要求1或2中所述的方法，其中這些葡萄糖聚合物選自艾考糊精和麥芽糊精，并且這些葡萄糖聚合物水解產物是完全水解的產物。

14.如權利要求1或2中所述的方法，其中用30kDa的截取閾值預過濾葡萄糖聚合物或其水解產物的樣品，并且使濾液與試驗中使用的細胞系相接觸。