[發明專利]胰激素產生細胞的制造方法及胰激素產生細胞、以及分化誘導促進劑

有效

• 申請號: 201380027230.0
• 申請日: 2013-05-24
• 公開（公告）號: CN104428410A
• 公開（公告）日: 2015-03-18
• 發明（設計）人: 豐島秀男;岡崎康司;橫尾友隆;菅原泉
• 申請（專利權）人: 學校法人埼玉醫科大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N15/09
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 楊宏軍

1.胰激素產生細胞的制造方法，其中從多能干細胞或胰組織干/祖細胞制造胰激素產生細胞，

其特征在于，在將多能干細胞或胰組織干/祖細胞分化誘導為胰激素產生細胞的過程中，向培養基中添加選自下述(1)～(3)中的至少一種的分化誘導促進劑，

(1)包含下述氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列由包含序列號1所示的堿基序列的DNA編碼；

(2)包含下述氨基酸序列并且具有促進向胰激素產生細胞的分化誘導的作用的多肽，所述氨基酸序列是在由包含序列號1所示的堿基序列的DNA編碼的氨基酸序列中取代、缺失和/或添加了一個或更多個氨基酸而得到的氨基酸序列；

(3)細胞的培養上清液，所述細胞中，作為外源基因整合有包含序列號1所示的堿基序列的DNA、或能夠和包含與所述DNA互補的堿基序列的DNA在嚴格條件下雜交的DNA。

2.如權利要求1所述的胰激素產生細胞的制造方法，所述制造方法包括以下工序(A1)～(E1)：

工序(A1)，在屬于TGF-β(轉化生長因子β)超家族的生長因子的存在下，對多能干細胞進行培養；

工序(B1)，將所述工序(A1)中得到的細胞在FGF(成纖維細胞生長因子)的存在下進行培養；

工序(C1)，將所述工序(B1)中得到的細胞在類視黃醇的存在下進行培養；

工序(D1)，將所述工序(C1)中得到的細胞在γ-分泌酶抑制劑的存在下進行培養；及

工序(E1)，在選自由毒晰外泌肽-4、HGF(肝細胞生長因子)、IGF-1(胰島素樣生長因子-1)及煙酰胺組成的組中的至少一種的因子的存在下，對所述工序(D1)中得到的細胞進行培養，

在所述工序(A1)～(E1)中的至少一個工序中，向培養基中添加所述分化誘導促進劑。

3.如權利要求1所述的胰激素產生細胞的制造方法，所述制造方法包括以下工序(A2)～(D2)：

工序(A2)，在屬于TGF-β(轉化生長因子β)超家族的生長因子、和選自屬于Wnt(無翅型MMTV整合位點)家族的生長因子及GSK-3(糖原合成酶激酶-3)抑制劑中的至少一種的因子的存在下，對多能干細胞進行培養；

工序(B2)，將所述工序(A2)中得到的細胞在屬于TGF-β超家族的生長因子的存在下進行培養；

工序(C2)，將所述工序(B2)中得到的細胞在類視黃醇的存在下進行培養；

工序(D2)，在選自由cAMP(環腺苷酸)增多劑、地塞米松、TGF-β1型受體抑制劑及煙酰胺組成的組中的至少一種的因子的存在下，對所述工序(C2)中得到的細胞進行培養，

在所述工序(A2)～(D2)中的至少一個工序中，向培養基中添加所述分化誘導促進劑。

4.如權利要求1所述的胰激素產生細胞的制造方法，所述制造方法包括以下工序(A3)～(E3)：

工序(A3)，在不存在屬于TGF-β(轉化生長因子β)超家族的生長因子、類視黃醇、FGF(成纖維細胞生長因子)及煙酰胺的條件下，對胰組織干/祖細胞進行培養；

工序(B3)，將所述工序(A3)中得到的細胞在屬于TGF-β超家族的生長因子的存在下進行培養；

工序(C3)，將所述工序(B3)中得到的細胞在類視黃醇的存在下進行培養；

工序(D3)，將所述工序(C3)中得到的細胞在FGF的存在下進行培養；及

工序(E3)，將所述工序(D3)中得到的細胞在煙酰胺的存在下進行培養，

在所述工序(A3)～(E3)中的至少一個工序中，向培養基中添加所述分化誘導促進劑。

5.一種胰激素產生細胞，所述細胞是通過權利要求1～4中任一項所述的胰激素產生細胞的制造方法人工制得的。

6.一種分化誘導促進劑，其誘導多能干細胞或胰組織干/祖細胞向胰激素產生細胞的分化，所述分化誘導促進劑包含下述(1)～(3)中的至少一者，

(1)包含下述氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列由包含序列號1所示的堿基序列的DNA編碼；

(2)包含下述氨基酸序列并且具有促進向胰激素產生細胞的分化誘導的作用的多肽，所述氨基酸序列是在由包含序列號1所示的堿基序列的DNA編碼的氨基酸序列中取代、缺失、和/或添加了一個或更多個氨基酸而得到的氨基酸序列；

(3)下述細胞的培養上清液，所述細胞中，作為外源基因整合有包含序列號1所示的堿基序列的DNA、或能夠和包含與所述DNA互補的堿基序列的DNA在嚴格條件下雜交的DNA。