[發(fā)明專利]高濃度干細(xì)胞的生產(chǎn)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201380026928.0
• 申請(qǐng)日: 2013-05-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104603263A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-05-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅廷燦;姜成根;曹廷允
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: K-干細(xì)胞有限公司;羅廷燦
• 主分類號(hào): C12N5/0775
• 分類號(hào): C12N5/0775;C12N5/02
• 代理公司: 北京律誠(chéng)同業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11006
• 代理人: 徐金國(guó)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用于制備高濃度干細(xì)胞的方法，更特定而言，涉及一種以足以用于臨床應(yīng)用的高收率來(lái)培育干細(xì)胞的方法。

背景技術(shù)

干細(xì)胞是指不僅具有自我復(fù)制能力還具有分化成至少兩種類型的細(xì)胞的能力的細(xì)胞，且能夠劃分為全能干細(xì)胞、亞全能干細(xì)胞(pluripotent?stem?cell)和多能干細(xì)胞(multipotent?stem?cell)。全能干細(xì)胞是具有能夠發(fā)育成一個(gè)完整個(gè)體的全能性質(zhì)的細(xì)胞，而這些性質(zhì)為卵母細(xì)胞和精子受精之后直到八細(xì)胞期的細(xì)胞所擁有。當(dāng)這些細(xì)胞分離并移植到子宮內(nèi)時(shí)，它們可發(fā)育成一個(gè)完整的個(gè)體。亞全能干細(xì)胞，即能夠發(fā)育成外胚層、中胚層和內(nèi)胚層來(lái)源的各種細(xì)胞和組織的細(xì)胞，來(lái)源于位于受精4-5天后生成的胚囊內(nèi)部的內(nèi)細(xì)胞群。這些細(xì)胞被稱為“胚胎干細(xì)胞”，能夠分化成各種其他組織細(xì)胞，但不能形成新的活有機(jī)體。多能干細(xì)胞，即僅能夠分化成特異于包含這些細(xì)胞的組織和器官的細(xì)胞的干細(xì)胞，不僅涉及胎兒期、新生兒期和成體期的各種組織和器官的生長(zhǎng)和發(fā)育，還涉及成體組織的穩(wěn)態(tài)的維持和組織損傷后誘發(fā)再生的功能。組織特異性多能細(xì)胞統(tǒng)稱為“成體干細(xì)胞”。

成體干細(xì)胞通過(guò)從各種人器官中取得細(xì)胞并使該細(xì)胞發(fā)育成干細(xì)胞而獲得，并且特征在于它們分化成僅特異性的組織。然而，近來(lái)，用于使成體干細(xì)胞分化成包括肝細(xì)胞的各種組織的試驗(yàn)取得巨大成功，這成為了熱點(diǎn)。特定而言，在再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中已經(jīng)做出努力，所述再生醫(yī)學(xué)通過(guò)使用細(xì)胞來(lái)再生生物組織和器官，并恢復(fù)它們由于疾病或事故等導(dǎo)致喪失的功能。在再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中經(jīng)常使用的方法包括以下步驟：從患者采集干細(xì)胞、血液來(lái)源的單核細(xì)胞或骨髓來(lái)源的單核細(xì)胞；通過(guò)試管培養(yǎng)誘導(dǎo)細(xì)胞的增殖和/或分化；和通過(guò)移植將所選擇的未分化的(干細(xì)胞和/或祖細(xì)胞)和/或已分化的細(xì)胞引入到患者體內(nèi)。因此，期望用細(xì)胞/組織替代療法來(lái)替代通過(guò)藥物或外科手術(shù)來(lái)治療疾病的現(xiàn)有經(jīng)典方法，所述細(xì)胞/組織替代療法是用健康細(xì)胞、組織或器官來(lái)替代受損細(xì)胞、組織或器官，因而干細(xì)胞的用途將進(jìn)一步增加。

因此，目前正在研究干細(xì)胞的各種功能。特定而言，由于使用間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞療法技術(shù)開(kāi)始受到關(guān)注，故已經(jīng)開(kāi)發(fā)了用于改進(jìn)自人體分離間充質(zhì)干細(xì)胞以便適合于治療目的的技術(shù)(WO?2006/019357，韓國(guó)專利第0795708號(hào)和韓國(guó)專利第0818214號(hào))。

然而，還沒(méi)有充分地研究出以足夠用于臨床應(yīng)用的量來(lái)增殖經(jīng)分離的干細(xì)胞的方法。

因此，本發(fā)明者們進(jìn)行了許多努力來(lái)以大的量制備干細(xì)胞，并且已經(jīng)發(fā)現(xiàn)當(dāng)在包含基礎(chǔ)培養(yǎng)基和至少兩種選自下組的成分的培養(yǎng)基中培養(yǎng)干細(xì)胞時(shí)，干細(xì)胞能夠在短時(shí)期內(nèi)以高濃度增殖，所述成分為：N-乙?；?L-半胱氨酸(NAC)、抗壞血酸、胰島素或胰島素樣因子、皮質(zhì)醇、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)、EGF(表皮生長(zhǎng)因子)和抗氧化劑，從而完成了本發(fā)明。

本背景技術(shù)部分揭示的上述信息僅用于增進(jìn)對(duì)本發(fā)明背景技術(shù)的理解，因而其可包含并未構(gòu)成已為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所知的現(xiàn)有技術(shù)的信息。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種在短時(shí)期內(nèi)以高濃度制備干細(xì)胞的方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種用于制備高濃度干細(xì)胞的方法，該方法包括在培養(yǎng)基中培養(yǎng)干細(xì)胞，所述培養(yǎng)基含有基礎(chǔ)培養(yǎng)基；和至少兩種選自下組的成分：N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)、抗壞血酸、胰島素或胰島素樣因子、皮質(zhì)醇、地塞米松(dexamethasone)、bFGF(堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子)、硫酸乙酰肝素、2-巰基乙醇、EGF(表皮生長(zhǎng)因子)和抗氧化劑。

通過(guò)以下詳細(xì)描述和所附權(quán)利要求書(shū)，本發(fā)明的其他特征和實(shí)施方式將更加明顯。

附圖說(shuō)明

圖1是示出在每種培養(yǎng)基中持續(xù)4天培養(yǎng)獲得自20、30、70和80歲成年男性的脂肪來(lái)源的干細(xì)胞期間的細(xì)胞群倍增水平的圖表。

具體實(shí)施方式

除非另有定義，本文所使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解相同的含義。一般而言，本文使用的命名和實(shí)驗(yàn)方法是公知的以及本領(lǐng)域通常采用的那些。

如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“干細(xì)胞”是指不僅具有自我復(fù)制能力而且具有分化成至少兩種類型的細(xì)胞的能力的細(xì)胞。“成體干細(xì)胞”是指在發(fā)育過(guò)程之后形成胚胎的各個(gè)器官的時(shí)期或者在成體時(shí)期出現(xiàn)的干細(xì)胞。