[發明專利]用于收集激光顯微剖切物的試樣收集器

有效

• 申請號: 201380026810.8
• 申請日: 2013-05-22
• 公開（公告）號: CN104321632B
• 公開（公告）日: 2018-03-06
• 發明（設計）人: F·施勞德拉夫
• 申請（專利權）人: 萊卡微系統CMS有限責任公司
• 主分類號: G01N1/04
• 分類號: G01N1/04;G01N1/28
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司11280
• 代理人: 王勇,王博

技術領域

本發明涉及一個用于激光顯微剖切裝置的激光顯微剖切物試樣收集器和一個這種激光顯微剖切裝置。

背景技術

在激光顯微剖切中為了繼續分析，借助于聚焦的激光射線選擇的組織范圍或者細胞從顯微鏡的組織試樣中分出來或者切下來(“剖切”)。

申請者的DE 100 18 253 C2，DE 10 2005 028 062 B4和DE 10 2005 008 925 A1描述了用于在使用顯微鏡的條件下激光顯微剖切的可能的方法和系統。

基于毛細管的分析儀已經發展到可以在小液滴或溶液中通過毛細系統輸運、分選、分析從組織中分解出來單個細胞或者甚至染色體，并且在分析后也可以繼續使用。以基于毛細管的分析技術例如由公司Fluidigm(http://www.fluidgim.com)和RainDance Technplogies(http://www.raindancetechnologies.com)應用和推廣。

為了可以利用這種技術分析，必需首先分離試樣和單個細胞；這可以通過基于熒光的流式細胞術、激光顯微剖切和移液到相應的用于毛細系統的輸送介質里面實現。

對于在激光顯微剖切中切割的所謂的“剖切物”提供不同的收集器供使用，例如所謂的“tube-caps”，八聯管條(8er streifen)，八聯管條蓋或者所謂的“口袋實驗室”(英文也稱為：Lab on a Chip)，例如AmpliGrid裝置。在激光顯微剖切過程以后從剖切機中物理地取出這個收集器，并且獨立地繼續處理。為此通常需要離心步驟和移液步驟，直到剖切物在相應的溶液中輸送到分析方法，例如聚合酶-鏈反應(英文：Polymerase Chain Reaction，PCR),逆轉譯PCR(RT-PCR)或者即時或定量PCR(rt-、qPCR)或者質譜儀(MS)。

這些工作原理的缺陷是，明顯地限制在利用激光顯微剖切分離以后直接用于自動地繼續處理試樣的可能性。此外必需的費事的離心和移液步驟含有高的污染和試樣損失隱患。

由EP 2 083 257 A1已知一種用于傳遞顯微的、分離的試樣的方法和裝置。在此微吸盤被定位在試樣上面，試樣從試樣體上在物體臺上切下來。在微吸盤偏轉之前微吸盤主動地從物體臺上吸住試樣，并且接著將試樣在另一位置再吹下來。由此可以將試樣轉移到反應罐里面。但是在抽吸前不可能或者至少不能足夠地視覺地檢查試樣，因為它還被保留的試樣體(試樣從其上被切割下來)包圍。

DE 10 2009 016 512 B4公開了一個激光切除腔，由一個容器組成，它可以從上面通過玻璃蓋氣密地封閉，要被檢查的試樣位于其底面上。該容器具有用于輸送氣體(例如氬氣)的輸入管和排出管。首先實現試樣檢查，且確定利用激光切除要去除的部位。通過激光顯微剖切儀在充分利用這種儀器的高分辨率物鏡的條件下進行這種檢查。在確定相應的部位以后利用激光切除從試樣上去除這個部位，并且通過輸入輸送氣體從氣密的容器例如輸送到分析裝置，例如質譜儀。根據分析結果可以分析其它試樣部位。為此可以使用已知的激光顯微剖切，它能夠以高精度以亞微米范圍剖切試樣切片。為了激光顯微剖切，所述激光切除腔被替換為常見的用于激光顯微剖切的試樣容器。

DE 103 29 674 A1的目的是克服UV切除的缺陷，例如在生物組織中的UV射線吸收或者較低的切割質量。為了切割生物材料，在這里建議使用超短皮秒或飛秒范圍的激光脈沖，在激光波長為大于400nm(近紅外)時重復頻率為至少1000Hz，其中激光聚焦在試樣上，用于在那里產生至少10¹²W/cm²的高強度。由此實現所謂的非共振多光子吸收，它為了切割作用產生離子。在一實施例中切割下來的生物材料通過電離作用與周圍的試樣分開并且落到以賴氨酸覆層的玻璃蓋上。在此例如將試樣通過載有它的薄膜涂覆在玻璃窗的底面上。硅環連接玻璃窗與以賴氨酸覆層的玻璃蓋。切下來的生物材料例如可以通過插入兩個針管通過硅環或者吸出來或者利用流體動力流沖出來并且利用無菌過濾器收集。上玻璃窗、硅環和用于收集切下來的材料的玻璃蓋一起形成封閉的無菌室。

因此本發明的目的是，在完成激光顯微剖切以后實現自動的試樣處理，尤其具有可視或者說觀察剖切物的可能性。

發明內容

這個目的通過如獨立權利要求所述的用于激光顯微剖切裝置的激光顯微剖切試樣收集器和這種裝置得以實現。在各從屬權利要求和下面的描述中公開了優選的實施例。